资源描述：
《chelex_100快速提取放线菌dna作为pcr扩增模板》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2010年第2期Chelex2100快速提取放线菌DNA作为PCR扩增模板周双清黄小龙黄东益胡新文陈吉良(海南大学农学院,儋州571737)摘要:旨在建立有效扩增16SrRNA基因序列的放线菌DNA快速提取的方法。采用Chelex2100法提取放线菌DNA,使用PCR扩增16SrRNA基因序列评价提取核酸的质量。结果显示,Chelex2100法能够在10min之内从放线菌中快速提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,符合理论预期
2、结果。因此,Chelex2100法提取放线菌DNA可以作为16SrRNA基因序列PCR扩增的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于放线菌菌株大规模地筛选和分类鉴定。关键词:Chelex2100放线菌DNA提取PCR16SrRNAARapidMethodforExtractingDNAfromActinomycetesbyChelex2100ZhouShuangqingHuangXiaolongHuangDongyiHuXinwenChenJiliang(AgronomyCollege,HainanUniversity,Danz
3、hou571737)Abstract:ToestablisharapidmethodforextractingDNAfromactinomycetes,DNAwasextractedfromactinomycetesbyChelex2100.Thequalityoftheextractionby16SrRNAgenewasevaluatedwithPCRtechnique.ThePCRproductof16SrRNAgenewasusedasamarkfragment.ResultsshowedtheChlex2100canquick
4、lyextracttheDNAfromactinomycetesaboutin10min.TheDNAcanbedirectlyappliedtothefollowingstep2PCRamplificationasDNAtemplate.ElectrophoresisresultsofthePCRproductswasclear.There2fore,Chelex2100extractionmethodcouldbeanefficientandreliablemethodforPCRdetectionandusedinactinom
5、ycetesscreeningandidentificationrapidly.Keywords:Chelex2100ActinomycetesDNAextractionPCR16SrRNA近年来,16SrRNA基因序列分析技术已广泛地步骤繁琐,费时费力,菌体需要量大,效率低下,而且应用于放线菌分类鉴定的研究中,16SrRNA分子普在提取过程中加入的酚、氯仿、异戊醇等有机溶剂有遍存在于各种原核生物细胞中,其基因既存在高度损操作者健康,对周边环境会产生一定污染,同时也保守区域,也存在局部的可变区。这为设计特异性增加了DNA提取的成本。因
6、此,探索一种快速、高引物利用PCR方法扩增16SrRNA基因序列快速鉴效且安全的DNA提取方法,以用于放线菌菌株大规别不同的菌群提供了条件。PCR扩增的前提条件模地筛选和分类鉴定显得十分必要。是提取较完整的DNA,有关放线菌DNA的提取,国本研究在综合分析各种DNA提取方法的基础[1]内外普遍采用酶法、物理法(如:液氮研磨、微波上,选取以Chelex2100法提取放线菌DNA作为16S[2,3][4]炉法等)以及化学法破除细胞壁,再与有机溶rRNA基因PCR扩增的模板,以期得到特异性强、明剂抽提相结合的办法,这些方法共同的缺点是操作亮
7、清晰的PCR条带,为有效、快速地对放线菌资源收稿日期:2009211202基金项目:海南省高等学校博士生创新科研课题(Hxwby2008207)作者简介:周双清,女,硕士生,研究方向:应用微生物资源;E2mail:annizhou23@1261com通讯作者:黄小龙,博士,研究方向:微生物资源;E2mail:hxl2012@163.com©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net124生物技术
8、通报BiotechnologyBulletin2010年第2期进行大规模分类鉴定研究奠定了基础。-20℃保存备用(上清即可作为PCR的模板)。1材料与方法1.2.316SrRNA基因扩增将提取的基因组DNA作1.1材料为
