转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdf

《转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南方农业学报JournalofSouthernAgricultureISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2015．5．745转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立王盛，谢芝勋+，谢丽基，谢志勤，黄莉，罗思思，邓显文，黄娇玲，刘加波(广西兽医研究所／广西畜禽疫苗新技术重点实验室．南宁530001)摘要：【目的】建立SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法，为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采

2、用SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法，检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数，以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因，建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、饼P基因实时荧光定量PCR的标准曲线，分别为尸．0．2858x+5．6695和y----0．2826x+2．1048，R2分别为0．9994和0．9989，相关性较高。在检测的5株转基因烟草中Gj：隧因的拷贝数分别为5、8、19、28和45，非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中外源基因

3、SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点，可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。关键词：转基因烟草；双标准曲线法；外源基因；拷贝数；SYBRGreenI实时荧光定量PCR中图分类号：Q786文献标志码：A文章编号：2095—1191(2015)05—0745—05Detectionmethodofexogenousgeneintransgenictobaccobyreal-timefluorcquantitativePCRreal-timenuorescencequantitativeWANGSh

4、eng，XIEZhi-xun+，XIELi-ji，XIEZhi-qin，HUANGLi，LUOSi—si，DENGXian—wen，HUANGJiao-ling，LIUJia—bo(GuangxiVeterinaryResearchInstitute／GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nannmg530001，China)Abstract：【Objective]TheSYBRGreenIreal-timequantitativePCRmethodfordetectingcopynumberof

5、exogenousgeneintransgenictobaccowasestablishtoprividereferencefordetectingcopynumberofexogenousgeneintransgenicplant．【Method]BySYBRGreenIreal—timefluorescencequantitativePCRtechnique，thecopynumberofgreen—fluores—centproteingene(GFP)asexogenousgeneintransgenictobaccowasdetected，takinge

6、ndogenousribonucleotidereductasegene(RNR2)oftobaccoasreferencegene．ThentwostandardCurvemethodofrelativequantificationwasestablishtode—tectcopynumberofexogenousgeneintransgenictobacco．【Resuh】ThestandardcurvesofGFPgeneandRNR2genewereconstructed．whichwerey：一0．2826x+2．1048andy=一0．2858x+5．

7、6695，respectively，andthecorrelationeoefficientswere0．9994and0．9989．Thecopynumbersofthefiveputativetransgenictobaccoswere5，8，19，28and45，respec—tively，andthatofnon—transgenictobaccowas0．【Conclusion】TheSYBRGreenIreal-timequantitativePCRmethodfordetectingcopynumberofexogenousgeneisrapid，c

8、onven