羊痘病毒实时荧光定量pcr检测方法的建立

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1、．‘－此．１．Ｖ；．＾－．＇－－．．．．Ｖ，．声．扩．．、分类号挑５２．６５＋４学校代码１０１２９ＵＤＣ６％．０９学号２０１３２１６０５１一，叩書寺；ｔ嗦攀硕±学位论文羊痘病毒实时焚光定量ＰＣＲ检测方法的建立ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅａｌｔｉｍｅＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＱＰＣ民ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆＣ幻ｐｒ扣＊＇＇Ｖ－＇．．．＇申请人；鹿方圆；Ｖ户学位名称Ｗ；兽医硕±＂ｃ．．领域：＇Ａ＂＇二一、＇二

2、。指导教师：：张七斤教授二＇－－．－‘．＇■＇．＇ｙ：；；论文提交曰期二〇—五年六月：Ａ．－－－、－？：巧．＇．ｖ／？，／．，Ｉ／．ｒ．、．Ｔ〇．■？．巧．巧蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究王作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｌ乂标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用一过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了

3、明确的说明并表示谢意。之处一申请学位论文与资料若有不实，本人承捏切相关责任。’论文作者签名：日期：ＷＵ／徊固＿＿内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知巧产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文王作成果时署名单位为巧蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电＾！子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可乂公布学位论文的全部或部分巧容（保密内容除外），

4、采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名Ｉ；關吗指导教师签名：終研日期．：感／／摘要本研究参考ＧｅｎＢａｎｋ中山羊痘病毒基因组序列（ＡＹ０７７８３６）和绵羊痘病毒基因组序列（ＡＹ０７７８３２），针对Ａ２９Ｌ基因的核昔酸序列，设计１对特异性引物和两条ＴａｑＭａｎ探针，同时制备重组质粒标准品。通过退火温度、引物浓度和探针浓度的筛选及优化，将标准阳性质粒１０倍倍比稀释后，作实时萊光定量ＰＣ民标准曲线，建立了检测羊痘病毒的实时蒙光定量ＰＣＲ方法，．对所建立的实时蒙光定量ＰＣＲ方、法的特异性灵敏性和重复性进行了评价，并用此方法对幅床样品进行了

5、检测。’：Ｃ民的５８．４Ｃ结果显示建立的实时萊光定量Ｐ反应条件为退火湿度，引物浓度４００ｎｍｏｌ／Ｌ，探针浓度２００ｎｍｏｌ／Ｌ。该诊断方法与其它四种病毒不发生交叉反应，并且山羊痘病毒和绵羊痘病毒之间也不发生交叉反应。该方法的重复性试验变异系２％４７０ｆ数均低于，并且双重实时巧光定量ＰＣＲ最低浓度检测限分别为ｇ和４４０毎。对标准阳性模板进行定量检测，生成的标准曲线相关系数分别为０．９９５和化９９７。结果表明所建立的方法具有良好的特异性、灵敏性、稳定性，可＾＾Ａ对ＧＴＰＶ和ＳＰＰＶ进行准确的定量检测。对１９份临床样品进行检测，ＧＴＰＶ阳性有１４份，ＳＰＰＶ

6、阳性４份ＧＴＰＶ和ＳＰＰＶ混合感。有，染有１份关键词；实时荣光定量ＰＣＲ；山羊痘病毒；绵羊痘病毒化ｅ－Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆ民ｅａｌｔｉｍｅＦｈｉｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕａｎｉａｉｖｅＱｔｔｔＰＣ民ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅ化ｏｄｏｆＣｏｗｐｏｒｖ如Ｍ五／ｊＡｂｓｔｒａｃｔＯｎｅａｉｒｏｆｅｃｉｆｉｃｒｉｍｅｒａｎｄｔｗｏＴａＭａｎｒｏｂ巧ｗｅＫｄｅｓｉｎｅｄａｎｄｓｔｈｅｓｉｚｅｄｐ巧ｐｑｐｇｙｎａｃｃｏｒｄｉｎｇ化ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡ２９Ｌｇｅｎｅｏｆｇｏａｔｐ

7、ｏｘｖｉｍｓ（ＡＹ０７７８３６）ａｎｄｓｈｅｅｐｐｏｘｖｉｒａｓ（ＡＹ０７７８３２）ｉｎＧｅｎＢａｎｋ．ＡｎｄＳｔａｎｄａｒｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ｅｒｅａ？Ｔｈｌｔｉｍｅ。１１〇１的ｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＧＲｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇＱｊｐｎｏｘｗｙｗｗａｓｉｐｅｓｔａｂｌｉｓｈｂｙ巧ｌｅｃｔｉｎｇａｎｄｏｐｔｉｍｉｚ虹ｇａｎｎｅａｌｉ