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《猪源ttv taqman实时荧光定量pcr检测方法的建立和应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、猪源TTVTaqman实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用中国动物传染病2011,l9(2):13—19ChineseJouma1ofAnima1InfectiousDiseases?研究论文?猪源TTVTaqman实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用侯军委,周艳君,王礞礞,李国新,于海,童光志(中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241)摘要:根据TTV1和TTV2的非编码区(UTR)的保守序列分别设计并合成两套特异性引物和Taqman探针,建立了鉴别TTVI和TTV2的Taqman实时荧光定量PC
2、R方法.通过常规PCR方法分别克隆TTV1和TTV2的非编码区(UTR)的保守序列并将其连入pMD18-T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品分别绘制标准曲线,TTV1标准曲线的相关系数为O.984,TTV2标准曲线的相关系数为O.994.检测结果显示,两种方法的灵敏度均可达l0copies/pL,除猪源TTV外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪瘟病毒,猪2型圆环病毒,猪流感病毒检测结果均为阴性.该方法重复性好,j比内和批间变异系数均小于3%.检测采集自广西和内蒙古的44份病料,TTVl的
3、阳性率为47.73%,TTV2阳性率为70.45%,TTVl和TTV2混合感染的阳性率为31.82%.猪源TTV检测方法的建立为该病毒的流行病学调查和定量提供了有效的手段.关键词:TTV1;TTV2;Taqman实时荧光定量PCR中图分类号:$852.659.2文献标志码:A文章编号:1674—6422(2ol1)02—0013一O7DEVELoPMENTANDAPPLICATIoNoFTAQMANREAL-TIMEFLUoRESCENCEQUANTlTATIVEPCRASSAYFORDETECTIoNoFP
4、oRCINEToRQUETENoVIRUSHOUJun—wei,ZHOUYan-jun,WANGMeng—meng,LIGuo—xin,YuHai,TONGGuang—zhi(ShanghaiVeterinaryResearchInstitute.CAAS,Shanghai200241.Chinn)Abstract:TwoTaqmanrea1.timefluorescencequantitativePCRswereestablishedusingtwosetsofprimersandprobesbasedon
5、theconserveduntranslatedregion(UTR)ofporcineTorqueTenovirusgenotype1and2(TTV1andTTV2).TheUTRsequencesofTTV1andTTV2wereclonedintothepMD18-Tvectorandaseriesofdilutedrecombinantplasmidswereusedtogeneratestandardcurves.ThequantitativePCRassayscoulddetectaslessa
6、s10copiesoftargetDNAofTTV1orTTV2.Theassayshowedgoodspecificityanddidnotcrossreactwithotherporcineviruses(PRRSCSFPCV2andsly)Thevariationcoefficientofintra—batchorinter—batchwerebothbelow3%whichindicatedgoodreproducibility.44clinicalsamplesofpigsfromNeimengan
7、dGuangxiweredetectedbythetwoquantitativePCRassays,andtheresultsshowedthat47.73%,70.45%and31.82%ofthesamplewerepositiveforTTVI,TTV2,andboth,respectively.Keywords:TTV1:TTV2:Taqmanreal—timefluorescencequantitativePCRTTV(Torquetenovirus,TTV)又称输血传播病毒(Transfusion
8、TransimittedVirus),该病毒收稿日期:基金项目:作者简介:通信作者:最初是由日本学者Nishizawa等采用代表性差异分析法从一名输血后发生急性感染的非甲～戊型肝炎2011-04-22上海市科技人才计划项目(09×D1405400);国家生猪现代产业技术体系建设项目(MYCYTX一009)侯军委,男,硕士研究生,预防兽医学专业童光志,E—mail:gztong@shvri.ac.cn
