猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立.pdf

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1、广西农业科学2010，41(11)：1223—1225Gu∞gxiAsriculturalSciences猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立马琳-，付薇1，何奇松z，徐贤坤1，易春华2，孙翔翔2，蒋家霞2，黄胜斌1，熊毅p(1广西动物疫病预防控制中心，南宁530001；2广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：根据GenBank中5’端非编码区的靶序歹Ⅱ设计了用=FTaqMan荧光定量PCR的1对引物及TaqMan探针，以猪瘟活疫苗病毒为模板，在常规PCR的基础上优化了TaqMan

2、荧光定量PCR反应条件，建立了猪瘟病毒(csFv)TaqMan荧光定量PCR检测方法。其敏感性和特异性试验结果表明，所建立的TaqMan荧光定量PcR检测方法对CSFV具有很高的特异性，其检测灵敏度可达5．03xl俨肛咖L。说明TaqMan荧光定量PCRj置用于CSFV的快速检测。关键词：猪瘟病毒；TaqMar度光定量PCR；TaqMan探针中图分类号：S858．28文献标识码：A文章编号：1002—8161(2010)11-1223-03DevelopmentofTaqManfluorescentqua

3、ntitativePCRmethodfordetectingclassicalswinefevervirus(CSFV)MALinl，FUWeil，HEQi-son92，xuXian-kunl，YIChun-hua2，SUNXiang-xian92，JIANGJia-xia2，HUANGSheng-binl，XIONGYil’(1GuangxiCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Nanning530001，China；2CollegeofAnimalSci

4、encesandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：ApairofpfimersandaTaqManprobeweredesignedaccordingtotheCSFV5’UTRsequencesofCSFVtakenfromGenBank，forperformingTaqManfluorescentquantitativePCR．RNAofclassicalswinefevervirus(CSFV)wasusedastem

5、plate，andthereactionconditionsofTaqManfluorescencePCRwereoptimizedbasedonconventionalPCR．TheTaqManfluorescentquantitativePCRmethodforCSFVwasdeveloped，whichshowedhishspecificityandhighsensitivitytoCSFV(detectionsensitivityof5．03×10≈斗∥斗【0，asrevealedbythesen

6、sitivityandspecificitytests．Therefore,thismethodcanbeusedforrapiddetectionofCSFV．Keywords：CSFV；TaqManfluorescentquantitativePCR；TaqManprobe猪瘟(ClassicalswiBefever。CSF)是一种严重危害养猪业发展的毁灭性传染病，在世界范围内广泛流行，其发病率和死亡率均较高[·’2]。近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化，由过去的急性、高致病性、高死亡率

7、转变为以温和型、非典型猪瘟和母猪持续性感染引起流产、死胎及新生仔猪发病、死亡为主。给兽医临床诊断带来了困难№】。因此，当前急需一种快速、特异、敏感的诊断方法用于该病的诊断和防制。目前．有关猪瘟诊断的方法主要包括：免疫荧光试验、细胞分离培养试验、动物接种试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、血清学方法等【7圳。但这些方法均存在自身的不足之处．如免疫荧光试验未能完全排除猪瘟感染，还需进行分离培养鉴定，病毒分离耗时较长；ELISA和血清学方法只能检测抗体，不适合早期诊断。且很难区分是由猪瘟病毒(Classica

8、lswinefevervirus。CSFV)还是由同属的牛病毒性腹泻病毒(Bovineviraldiarrheavirus，BVDV)产生的抗体；RT-PCR易漏检和被污染。可见，传统的检测方法很难对CSFV进行快速、灵敏地检测。为此，本研究将TaqMan荧光定量PCR用于CSFV诊断，在常规PCR的基础上优化了TaqMan荧光定量PCR反应条件．建立了敏感的CSFvTaqMan荧光定量PCR检测方法，为实现快速、灵敏、准确诊