葛根素对lps诱导raw264.7细胞炎性细胞因子表达的影响及机制

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1、温州医学院硕士学位论文一、论文摘要题名葛根素对LPS诱导脚264．7细胞炎性细胞因子表达的影响及机制(中文摘要)研究目的通过观察葛根素(Puerarin)预处理对细菌脂多糖(Lipopolys—accharide，LPS)体外诱导激活小鼠巨噬细胞RAW264．7后细胞的形态变化、细胞内核转录因子．Id3(nuclearfactor-rB,NF．r,B)及炎性细胞因子表达的影响，探讨其抗炎机制，为葛根素应用于急性肺损伤(AcuteLungInjury，ALl)／急性呼吸窘迫综合征(AcuteRespiratoryDistressSyndrome，ARDS)的临床治疗提

2、供理论依据。方法1、细胞分组取对数期生长良好的细胞随机分为空白对照组、LPS模型组(LPS1ug／mL)、葛根素预处理+LPS组(葛根素100、200、400umol／L预处理细胞24h后，换含LPS1ug／mL培养基孵育细胞24h)。各组在相同的时间点加入LPS(空白对照组加入等量PBS)。2、采用CCK．8法测定不同浓度葛根素和LPS对巨噬细胞RAW264．7活性的影响，以选择合适浓度；以检测的吸光度(Absorbance，A)值大小作为细胞相对数量的比较。3、Giemsa染色，光学显微镜下观察巨噬细胞形态学改变。4、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞

3、上清液中MIP·2、TNF-a表达水平。5、采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)动态测定NF-v,Bp65mRNA的表达。结果1、采用CCK．8法检测及改进寇氏法计算葛根素的最大无毒浓度(TC0)为520．361urnol／L，半数毒性浓度(TC50)为5451．77umol／L。当葛根素的浓度为100，200，400umol／L时，与lug／mLLPS共培养均未显示出细胞毒性作用(P<0．05)。2、倒置显微镜下观察，未经LPS刺激的RAW264．7细胞体积较小，成球形，少部分成梭形。LPS(1ug／mL)刺激后细胞形态向成树突状改变(具体表现温州医学院硕士学

4、位论文为胞体增大，形态不规则，伪足大量伸出)，葛根素100umol／L组干预后可明显抑制LPS导致的细胞形态学变化，葛根素200和400umol／L干预组的抑制效果更显著，但最大剂量组仍未达到LPS刺激前的形态。3、LPS组细胞上清中TNF．Q及MIP．2的水平(310．51±26．98pg／mL、384．28+42．59pg／mL)比正常组(41．46+11．68pg／mL、34．81±9．36pg／mL)明显增高，差异存在统计学意义(P

5、、291．29+__23．21pg／mL200umol／L．164．64±18．80Pg／mL、196．17+24．78pg／mL；400umol／L：125．14+15．05pg／mL、81。93±10．50pg／mL)较LPS组明显降低，差异存在统计学意义(P

6、达量明显上升，达到正常对照组的12．99倍，而经过葛根素100umol／L预处理后，NF．r,Bp65的释放受到明显抑制，下降到正常对照组的6．49倍，葛根素200和400umol／L干预组的抑制效果更显著(4．20倍；2．54倍)，并且葛根素各亚组间Ct值具有统计学差异的(P<0．05)，但最大剂量组NF—r,Bp65的释放仍未达到LPS刺激前的水平(P

7、a及MIP-2的水平，经葛根素作用后，TNF．a及MIP．2的释放明显抑制，并呈现一定的浓度依赖性。3、葛根素可下调经LPS活化的巨噬细胞RAW264．7内NF—rJ3p65mRNA的表达，可能是其抗炎作用的机制之一。关键词葛根素；巨噬细胞；脂多糖；NF—v,．13温州医学院硕士学位论文SubjectEffectofPuerarinPretreatmentonNuclearFactor-剃BandProinflammatoryCytokinesexpressioninMacrophagesRAW264．7activatedwithLPSinVitro(Abstr