维拉帕米对lps诱导的大鼠淋巴细胞凋亡及促炎-抗炎细胞因子比例的影响论文

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1、维拉帕米对LPS诱导的大鼠淋巴细胞凋亡及促炎/抗炎细胞因子比例的影响论文王震李刚祁晓平黎介寿【关键词】内毒素维拉帕米淋巴细胞凋亡细胞因子0引言近来研究发现维拉帕米能够调控内毒素（LPS）诱导的局部和全身的促炎/抗炎细胞因子的表达，并且能够降低试验动物死亡率［1-2］.脓毒症时促炎/抗炎细胞因子与淋巴细胞的凋亡之间的关系很复杂，而且维拉帕米对循环内淋巴细胞的凋亡、促炎/抗炎细胞因子平衡方面的体内研究很少.因此本研究旨在探讨维拉帕米对LPS诱导的促炎/抗炎细胞因子平衡、淋巴细胞凋亡的影响，及其循环内促炎/抗炎细胞因子比例与淋巴

2、细胞凋亡的关系.1材料和方法1.1材料成年雄性SD大鼠(体质量250~300g)由南京军区南京总医院实验动物中心提供，实验前禁食8h.LPS,维拉帕米，密度梯度离心液Histopaque1.077均购于美国Sigma公司；凋亡试剂盒购于南京凯基生物科技发展公司；TNFα,IL6和IL10ELISA试剂盒购于美国Biosource公司.1.2方法1.2.1分组及处理42只大鼠随机均分为7组：空白对照组(A)；LPS组(B)；(C～F)不同剂量维拉帕米组；维拉帕米对照组(G).C～F组大鼠分别给予1,2.5,5,10m

3、g/kg维拉帕米腹腔注射30min后；B～F组大鼠给予腹腔注射LPS(10mg/kg,1μL/g)，LPS用90mL/L无菌生理盐水配置成1mL/L浓度；G组仅给予10mg/kg维拉帕米.以上各组均于注射后1h，麻醉、处死大鼠.freelin）后，得血清置于-80℃待检测，留取抗凝血2～3mL分离淋巴细胞.1.2.2分离淋巴细胞淋巴细胞通过密度梯度离心法分离，2～3mL抗凝血置于Histopaque1.077上层，离心700g，30min.分离得细胞PBS洗涤两次后，1∶9加入冰红细胞裂解液(mmol/L)NH4Cl155

4、,KHCO310,EDTA0.1,4℃，7min.淋巴细胞纯度约98%，活度约97%.1.2.3流式细胞术检测淋巴细胞凋亡淋巴细胞凋亡采用试剂盒说明书进行检测.调整浓度至1×109/L,以200g离心5min，弃上清，PBS洗1次,离心，弃上清，悬浮于500μL结合缓冲液，加入2μLannexinVFITC和5μLPI染液，混匀后室温、避光15~30min，流式细胞术检测.凋亡细胞表型为AnnexinV+/PI-.1.2.4检测细胞因子浓度血清TNFα,IL6和IL10浓度采用ELISA试剂盒检测，操作严格按照说明

5、书进行.统计学处理：计量数据采用x±s表示.统计分析采用SPSS软件包进行，采用非参数秩和检验（Manned,2001,13:668-670.［2］LiG,QiXP,,BordoniV,etal.Extracorporealtherapiesinnonrenaldisease:Treatmentofsepsisandthepeakconcentrationhypothesis［J］.BloodPurif,2004,22(1):164-174.［4］CavaillonJM,AdibConquyM,CloezTayar

6、aniI,etal.ImmunodepressioninsepsisandSIRSassessedbyexvivocytokineproductionisnotageneralizedphenomenon:ArevieiceinfectedbyrabiesvirusvaccinatedagainstitandimmunomodulatedmunolMicrobiolInfectDis,2004,27(6):393-411.