表达结核分枝杆菌ag85b与gst融合蛋白的dna疫苗构建及免疫保护研究-论文

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1、表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究*论文.freelIL-2和mIFN-γ的平均含量分别为(339.9±59.4)pg/ml和(432.1±74.4)pg/ml，显著高于3个阴性对照组（P0.001），与BCG免疫组差异无显著性(P＞0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10差异无显著性。pVS85BG免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌菌落数分别为(32954.2±4457.5)CFU/g，(32748.0±3634.4)CFU/g和(31741.7±7293.7)CFU/g，分别低于pVAX1、pIL2S和PBS等3个阴性对照组的相应器官的结核

2、菌载量（P0.001），同时也显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS85BG能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力显著增强。【关键词】结核；DNA疫苗；细胞因子；免疫保护【Abstract】ObjectiveToevaluatetheabilitytoproducecytokinesinvitroandtheprotectiveefficacyofthemiceimmunizedbytheTBDNAvaccinepVS85BGidpVS85BGexpressingfusionproteinofMycobacteriumtuberculo

3、sisAg85BandglutathioneS-transferasealeC57BL/6inbredmicein5groupsimmunizedesiceineachgroupinedforhIL-2，mIL-2，mIFN-γ，mIL-6andmIL-10bysandiceineachgroupthespleens，lungsandlivers.ResultsTheaverageconcentrationsofmIL-2andmIFN-γinthesupernatantsfrompVS85BGimmunizedmiceland(432.1±74.4)pg/ml，significantly

4、higherthanthosefromthepVAX1，pIL2S，andPBSinjectedcontrols(P0.001).NosignificantlydifferencehasbeenobservedforthemIL-6andmIL-10concentrationsfromthemiceinall5groups.TheaverageMtuberculosisloadsinthespleens，liversandlungsinthepVS85BGimmunizedgroupmunizedgroupmunizedcontrols.ConclusionTBDNAvaccinepVS8

5、5BGmuneresponsemunitytoH37Rvchallengeintheimmunizedmice.【Keytuberculosis；TBDNAvaccine；cytokines；immuneprotection有效控制结核病的流行，除了政府重视，加强健康教育，采取一般性的预防措施和即时发现并治愈痰涂阳性肺结核病人以外，有效预防结核病的疫苗的普遍接种是关键［1］。大量实践证明，BCG对控制原发结核、降低粟粒性结核和结核性脑膜炎的发病率是肯定的。近十几年，世界各地进行了8次BCG现场试验，结果是矛盾的。在欧洲、加拿大和美国部分地区进行的试验保护率较高，总发病率下降70%～80%。

6、但在美国南方和南印度的结果相反，保护效果很差［2，3］。因此，寻求安全、稳定、效果更好的结核疫苗一直是结核病和疫苗专家工作的重点。本研究利用基因操作技术，将具有免疫保护作用的蛋白Ag85B(antigen85B)和具有使表达合蛋白稳定的谷胱甘肽-S转移酶（glutathioneS-transferase，GST）的基因连接，插入美国FDA推荐可用于人体的表达载体pVAX1中，构建表达结核菌保护抗原Ag85B与GST的融合蛋白的真核表达载体。提取并纯化该质粒后，免疫纯系近交系C57BL/6小鼠，免疫小鼠抵抗经静脉注射结核菌H37Rv攻击的能力显著增强。报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.

7、1结核菌H37Rv标准株（ATCC27294）由武汉大学医学院免疫学系刘君炎教授赠送。其毒力通过定期小鼠体内传种维持。结核菌传种在改良罗氏(Lo，L-J)培养基进行。1.1.2pVAX1真核表达载体美国Invitrogen公司产品，由美国国立卫生研究院张颖研究员提供。其基因序列及多克隆位点见该公司网站资料［4］。1.1.3Gex-2T载体大连宝生物公司提供。1.1.4大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）DH5α