牛结核分枝杆菌抗原蛋白ag85b的表达及纳米疫苗的制备

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1、牛结核分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备杜军，邓光存（宁夏大学生命科学学院，银川750021）摘要：以牛结核分枝杆菌（Mycobacteriumbovis，MTB）C68001株基因组DNA为模板，克隆免疫优势抗原基因Ag85B，构建重组表达质粒pET－28a－ag85b，转化入大肠埃希菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达重组蛋白，对表达产物进行SDS－PAGE和TB）；Ag85B抗原；原核表达；纳米疫苗中图分类号：R392．11文献标识码：A：0439－8114（2015）06

2、－1421-04DOI:10.14088/j.ki.issn0439-8114.2015.06.035ExpressionofMycobacteriumBovisAntigenProteinAg85BandPreparationofItsNano－vaccineDUJun，DENGGuang－cun（CollegeofLifeScience，NingxiaUniversity，Yinchuan750021，China）Abstract：Theimmuno－dominantantigengeneAg

3、85BicDNAofMycobacteriumbovisstrainC68001astemplateandusedtoconstructtherebinantplasmidpET－28a－ag85b，transformedintoE．coliBL21（DE3）．InducedbyIPTG，theexpressedrebinantproteinethod．Thenano－vaccineethod.Thedrugloadingandencapsulationefficiencyofthenano－va

4、ccineettingthetechnologicalrequirementsofnano－vaccine．Keybovis（MTB），Ag85Bantigen，prokaryoticexpression，Nano－vaccine收稿日期：201－12－29基金项目：宁夏自然科学基金项目（NZ13036）简介：杜军（1978－），男，宁夏惠农人，副教授，硕士，主要从事微生物与基因工程研究，（）13709599023（电子信?aclass="__cf_email__"href="/cdn-cgi/l

5、/email-protection"data-cfemail="25c1868c41504f504b654b5d50">[email protected]．edu．。牛结核病是由牛结核分枝杆菌（Mycobacteriumbovis，MTB）引起的一种牛的慢性消耗性传染病，该病可通过病畜传染给人类或其他动物，严重影响畜牧业的可持续健康发展，并威胁人类的健康［1，2］。据2009年世界卫生组织（ECL购于环亚生物科技有限公司；Anti－His标签小鼠单克隆抗体、HRP－羊抗鼠IgG（H＋L）

6、、ProteinPureNi－NTAResin购于北京全式金生物技术有限公司；IPTG购自陕西省西安化玻站化学厂；丙烯酰胺、N，N′－甲叉双丙烯酰胺、过硫酸胺购自华美生物工程有限公司；β－巯基乙醇、溶菌酶、考马斯亮蓝R250购自北京北方同正生物技术发展有限公司；TEMED购自Promega公司；明胶、大豆油购于新泰裕兴生物科技有限公司；T公司；HRP－羊抗鼠IgG；凯基BCA蛋白检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。高速冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司；UV－4802型紫外可见分光光度计，

7、UNIC公司；超声破碎仪，UIBRA－CELL公司；Hitachi－7650B型电子透射显微镜（宁夏医科大学）。1．2方法1．2．1重组质粒pET－28a－ag85b的构建根据文献［13］的方法和操作步骤构建重组质粒pET－28a－ag85b并对其进行鉴定。1．2．2重组质粒pET－28a－ag85b诱导表达将阳性重组菌株接种于10mL含有30μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养至OD600nm值为0．5～0．7时，加入IPTG至终浓度1mmol/L，37℃诱导表达4～5h，收集菌

8、体。以同样的方法诱导空载体pET－28a作为对照。1．2．3Ag85B重组蛋白SDS－PAGE和ECL试剂盒化学发光曝光显影。1．2．4Ag85B重组蛋白的纯化1）将过滤的镍柱用Lysisbuffer进行平衡，之后加入Ag85B蛋白菌液，室温下颠倒混匀2h，混匀后静置。2）加入PB64等。研究发现，在牛分枝杆菌、结核分枝杆菌和BCG培养液中Ag85B含量丰富［15］。Ag85复合物参与菌体细胞壁的合成，对维持菌体的结构起着重要作用［16］。研究表明，Ag85A和Ag85B可诱导特异