表达结核分枝杆菌ag85b与gst融合蛋白的dna疫苗构建及免疫保护研究-

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1、表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究*作者：朱中元1，刘建兵１，王海波１，谢勇１，张春发２，张颖【摘要】目的评价构建的结核DNA疫苗pVS85BG免疫的小鼠体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。方法利用基因操作技术将结核菌Ag85B基因和谷胱甘肽S转移酶基因插入pVAX1载体构建表达结核菌Ag85B和GST融合蛋白的DNA疫苗pVS85BG。将雌性C57BL/6小鼠分成5组，每组20只，分别用pVS85BG、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫，以相同的剂量加强免疫2次，均间隔2周。另一组用BCG(105CFU)皮

2、内注射免疫1次。每组的10只鼠在最后一次加强免疫后，无菌取脾培养，上清供检测细胞因子用。另外10只小鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击，于2周后取脾、肝和肺进行培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS85BG免疫组的鼠脾淋巴细胞的培养上清中的mIL-2和mIFN-γ的平均含量分别为(339.9±59.4)pg/ml和(432.1±74.4)pg/ml，显著高于3个阴性对照组（P<0.001），与BCG免疫组差异无显著性(P＞0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10差异无显著性。pVS85BG免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌菌落数分别为(32954.2±4457

3、.5)CFU/g，(32748.0±3634.4)CFU/g和(31741.7±7293.7)CFU/g，分别低于pVAX1、pIL2S和PBS等3个阴性对照组的相应器官的结核菌载量（P<0.001），同时也显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS85BG能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力显著增强。【关键词】结核；DNA疫苗；细胞因子；免疫保护【Abstract】ObjectiveToevaluatetheabilitytoproducecytokinesinvitroandtheprotectiveeffi

4、cacyofthemiceimmunizedbytheTBDNAvaccinepVS85BGidpVS85BGexpressingfusionprotEinofMycobacteriumtuberculosisAg85BandglutathioneS-transferasealeC57BL/6inbredmicein5groupsimmunizedesiceineachgroupinedforhIL-2，mIL-2，mIFN-γ，mIL-6andmIL-10bysandiceineachgroupthespleens，lungsandlivers.ResultsThea

5、verageconcentrationsofmIL-2andmIFN-γinthesupernatantsfrompVS85BGimmunizedmiceland(432.1±74.4)pg/ml，significantlyhigherthanthosefromthepVAX1，pIL2S，andPBSinjectedcontrols(P<0.001).NosignificantlydifferencehasbeenobservedforthemIL-6andmIL-10concentrationsfromthemiceinall5groups.Theaverag

6、eMtuberculosisloadsinthespleens，liversandlungsinthepVS85BGimmunizedgroupmunizedgroupmunizedcontrols.ConclusionTBDNAvaccinepVS85BGmuneresponsemunitytoH37Rvchallengeintheimmunizedmice.【Keytuberculosis；TBDNAvaccine；cytokines；immuneprotection有效控制结核病的流行，除了政府重视，加强健康教育，采取一般性的预防措施和即时发现并治愈痰涂阳性肺结核

7、病人以外，有效预防结核病的疫苗的普遍接种是关键［1］。大量实践证明，BCG对控制原发结核、降低粟粒性结核和结核性脑膜炎的发病率是肯定的。近十几年，世界各地进行了8次BCG现场试验，结果是矛盾的。在欧洲、加拿大和美国部分地区进行的试验保护率较高，总发病率下降70%～80%。但在美国南方和南印度的结果相反，保护效果很差［2，3］。因此，寻求安全、稳定、效果更好的结核疫苗一直是结核病和疫苗专家工作的重点。本研究利用基因操作技术，将具有免疫保护作用的蛋白Ag85B(antigen85B)和具有使表达合蛋白稳定的谷胱甘肽-S转移酶（glutathi