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时间:2018-11-22
《表达结核分枝杆菌ag85b与gst融合蛋白的dna疫苗构建及免疫保护研究-》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究*作者:朱中元1,刘建兵1,王海波1,谢勇1,张春发2,张颖【摘要】目的评价构建的结核DNA疫苗pVS85BG免疫的小鼠体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。方法利用基因操作技术将结核菌Ag85B基因和谷胱甘肽S转移酶基因插入pVAX1载体构建表达结核菌Ag85B和GST融合蛋白的DNA疫苗pVS85BG。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS85BG、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫,以相同的剂量加强免疫2次,均间隔2周。另一组用BCG(105CFU)皮
2、内注射免疫1次。每组的10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,上清供检测细胞因子用。另外10只小鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击,于2周后取脾、肝和肺进行培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS85BG免疫组的鼠脾淋巴细胞的培养上清中的mIL-2和mIFN-γ的平均含量分别为(339.9±59.4)pg/ml和(432.1±74.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组差异无显著性(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10差异无显著性。pVS85BG免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌菌落数分别为(32954.2±4457
3、.5)CFU/g,(32748.0±3634.4)CFU/g和(31741.7±7293.7)CFU/g,分别低于pVAX1、pIL2S和PBS等3个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),同时也显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS85BG能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力显著增强。【关键词】结核;DNA疫苗;细胞因子;免疫保护【Abstract】ObjectiveToevaluatetheabilitytoproducecytokinesinvitroandtheprotectiveeffi
4、cacyofthemiceimmunizedbytheTBDNAvaccinepVS85BGidpVS85BGexpressingfusionprotEinofMycobacteriumtuberculosisAg85BandglutathioneS-transferasealeC57BL/6inbredmicein5groupsimmunizedesiceineachgroupinedforhIL-2,mIL-2,mIFN-γ,mIL-6andmIL-10bysandiceineachgroupthespleens,lungsandlivers.ResultsThea
5、verageconcentrationsofmIL-2andmIFN-γinthesupernatantsfrompVS85BGimmunizedmiceland(432.1±74.4)pg/ml,significantlyhigherthanthosefromthepVAX1,pIL2S,andPBSinjectedcontrols(P<0.001).NosignificantlydifferencehasbeenobservedforthemIL-6andmIL-10concentrationsfromthemiceinall5groups.Theaverag
6、eMtuberculosisloadsinthespleens,liversandlungsinthepVS85BGimmunizedgroupmunizedgroupmunizedcontrols.ConclusionTBDNAvaccinepVS85BGmuneresponsemunitytoH37Rvchallengeintheimmunizedmice.【Keytuberculosis;TBDNAvaccine;cytokines;immuneprotection有效控制结核病的流行,除了政府重视,加强健康教育,采取一般性的预防措施和即时发现并治愈痰涂阳性肺结核
7、病人以外,有效预防结核病的疫苗的普遍接种是关键[1]。大量实践证明,BCG对控制原发结核、降低粟粒性结核和结核性脑膜炎的发病率是肯定的。近十几年,世界各地进行了8次BCG现场试验,结果是矛盾的。在欧洲、加拿大和美国部分地区进行的试验保护率较高,总发病率下降70%~80%。但在美国南方和南印度的结果相反,保护效果很差[2,3]。因此,寻求安全、稳定、效果更好的结核疫苗一直是结核病和疫苗专家工作的重点。本研究利用基因操作技术,将具有免疫保护作用的蛋白Ag85B(antigen85B)和具有使表达合蛋白稳定的谷胱甘肽-S转移酶(glutathi
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