结核分枝杆菌mtb8.4dna疫苗构建及免疫保护研究论文

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1、结核分枝杆菌Mtb8.4DNA疫苗构建及免疫保护研究论文.freelIL-2和mlFN-Y平均含量分别为（290.0±112.9）pg/ml和（501.7±79.4）pg/ml，显著高于3个阴性对照组（P0.001），与BCG免疫组无显著性差异（P0.05）。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为（39176.9±3702.6）、（18780.1±2535.8）和（24410.3±1846.8）CFU/g，分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量（P0.001），仅脾结核菌

2、载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。关键词:结核分枝杆菌;DNA疫苗;分泌蛋白;细胞免疫;免疫保护ConstructionandprotectiveefficacyoftheTBDNAvaccineexpressingMycobacteriumtuberculosissecretoryMtb8.4protein.Abstract:ObjectiveToevaluatethecapacityinproductionofcytokinesinvitroandth

3、eprotectiveefficacyofthemiceimmu-nizedidpVS84expressingsecretoryproteinofMycobacteriumtuberculosisMtb8.4tb8.4intothevectorpVAX1.20femaleC57BL/6inbredmicein5groupsimmu-nizedesiceineachgroupinedforhIL-2，mIL-2，mIFN-γ，mIL-6andmIL-10bysandiceineachgroupthespleens，lungsandlivers.ResultsTheavera

4、geconcentrationsofmIL-2andmIFN-γinthesupe-matantsfrompVS84immunizedmiceLand501.7+79.4pg/mLrespectively，significantlyhigherthanthosefromthepVAX1，pIL2S，andPBSinjectedcontrols（P0.001）.NosignificantlydifferencehasbeenobservedforthemiL-6andmiL-10concentrationsfromthemiceinall5groups.Theaverage

5、Mtuberculosisloadsinthespleens，liversandlungsinthepVS84immunizedgroupmunizedgroupmunizedcontrols.ConclusionTBDNAvaccinepVS84muneresponsemunitytoH37RvchallengeintheimmunizedmiceequaltoBCGimmu-nization.Keytuberculosis;TBDNAvaccine;CMI;Protectiveefficacy结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，结核菌）是

6、引起结核病（TB）的病原体，在全球范围内，TB每年引起的病死病例为200万，每年新出现的结核病例高达800万［1］。AIDS在世界范围内的蔓延和耐药性结核病例和多耐药结核病例的增加，使有效控制TB的工作更加困难。卡介苗（BCG）在预防儿童结核病成效已得到肯定，但预防成人TB则效果不稳定。经严格设计控制的调查结果表明，BCG的保护率在0～80%之间［2］。为此寻求优效的新型疫苗乃当务之急。不少学者尝试亚单位疫苗和DNA疫苗在结核病的预防工作中发挥更加有效的作用。从目前的结果看，效果仍然欠缺［3］。本研究利用基因操作技术，将具有免疫保护作用的蛋白Mtb8.4的基因连接、插入美

7、国FDA推荐可用于人体的表达载体pVAXl中，构建表达结核菌保护抗原Mtb8.4的真核表达载体。提取并纯化该质粒后，免疫纯系近交系C57BL/6小鼠，免疫小鼠抵抗经静脉注射结核菌H37Rv攻击的能力显著增强，结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1结核菌H37Rv标准株（ATCC27294）由武汉大学医学院免疫学系刘君炎教授赠送。其毒力通过定期小鼠体内传种维持。细菌的增殖在改良罗氏（Lo，L-J）培养基进行。1.1.2pVAXl真核表达载体美国Invitrogen公司产品，由美国国立卫生研究院张颖研究员提供。其基因序列及