mpt64 dna疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用论文

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1、MPT64DNA疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用论文孙平，骆旭东，朱道银，唐国建【关键词】结核分枝杆菌【Abstract】AIM:ToexploretheprotectiveefficacyoftheDNAvaccineencodingMycobacteriumtuberculosisMPT64inmiceinfectediceuscularlyimmunizedicemunizationforDNAvaccinegroupsand100dafterforBCGvaccinatedgroup.Themiceinthevaccinatedgroupsan

2、dcontrolgroupsovedrespectivelyandthenumberofCFUinorgansandhistopathologicchangesined.Theantibodylevel,IFNγ,IL4andthesurvivaltimeinallofthemicephocytesandthespleenlymphocyteproliferationfromBCGgroupandpcDNA/MPT64groupberofbacterialcoloniesinthelungsandspleenssignificantlydecreased

3、at6thonaryhistopathologicalchangesmatoryinfiltrationandlungtissuenecrosis,andinBCGgroupbygranulomasandnumerousmacrophages,lymphocytesandafematoryinfiltrationandafeacrophages.Theresultsinspleenilartothoseinlungs.ThesurvivaltimeofBCGvaccinatedmiceafterchallengeeofpcDNA/MPT64grouppr

4、ovetheprotectiveefficacyofimmunizedmiceagainstM.tuberculosischallenge.【Keytuberculosis;MPT64;DNAvaccine【摘要】目的：研究MPT64DNA疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.方法：C57BL/6小鼠36只，随机分为4组.A组（PBS）、B组（pcDNA3.1）、C组（BCG）、D组（pcDNA/MPT64）；分别于胫前肌注射质粒DNA免疫，70μg/次，1次/2L（相当于0.1mg），含活菌1×106CFU.将经过小鼠体内毒力复苏的H37Rv转种于改良罗

5、氏培养基上，37℃保湿培养2L的菌悬液,.freelL菌悬液含M.H37Rv1×106CFU活菌1mg.攻击时间为BCG接种后100d和末次质粒DNA免疫后5L菌悬液，实施攻击；攻击后6munol,1992;36:307).1.2.1肺、脾荷菌量及病理学检测无菌手术取左全肺，称取一定量的左肺组织加入经过灭菌的5mL组织匀浆器中，加2mL灭菌生理盐水，研磨成匀浆；用40mL/L硫酸2mL中和,摇匀后静置15min,以此原液作10倍梯度稀释；选取3个稀释度的悬液100μL，分别涂布于3个经过37℃复温的改良罗氏培养基上（含BCG抑制剂2thiopheneca

6、rboxylicacidhydrazide2mg/L），37℃保湿培养4g/L）包被酶标板，4℃过夜.1g/L牛血清白蛋白封闭30min，洗涤后加入不同稀释度的待检血清，二抗为HRP酶标羊抗鼠IgG，DAB显色，波长490nm测吸光度（A）值.以正常鼠血清作阴性对照，A值0.05以上、A实验组/A对照组≥2.1为阳性.②特异性淋巴细胞增殖实验.分别分离各组小鼠的脾淋巴细胞，用含10g/LFCS的RPMI1640调整细胞密度为2×107/L，活细胞数为90%以上，200μL/孔加入96孔细胞培养板中，实验组每孔加入5μLPPD，对照孔不加PPD，调零孔不加

7、淋巴细胞；37℃50mL/LCO2孵箱培养68h后，每孔加入20μLMTT（5g/L溶于PBS，pH7.2），继续培养4h后终止培养，1000r/min离心10min，吸弃上清，每孔加入DMSO150μL，振荡10min，测A570nm值，结果用刺激指数（stimulationindex，SI）=A实验组/A对照组表示.③IFNγ的诱导和测定.用含10g/LFCS的RPMI1640调整细胞密度为5×107/L，200μL/孔加入96孔细胞培养板中，同时每孔加入5μLPPD，37℃50mL/LCO2孵箱培养72h后，每组5个孔的培养液混合，5000r/mi

8、n离心5min，取上清-20℃冻存备检.IFNγ的含量的检测用ELISA的方法，