结核分枝杆菌联合dna疫苗初免—bcg加强的免疫效果观察

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1、结核分枝杆菌联合DNA疫苗初免—BCG加强的免疫效果观察：高蕾,鲍朗,郝牧,张会东【摘要】　　目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA（Ag85A和ESAT6）疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免—BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察。方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS阴性对照组,DNA初免—BCG异源加强组,DNA（Ag85A和ESAT6）初免DNA同源加强组和BCG阳性对照组,共进行3次免疫,初免2次,最后1次加强,间隔2周1次。PBS组3次均注射PBS溶液;DNA/BCG组以质粒DNA免疫2次,最后1次以BCG加强免疫;DN

2、A/DNA组3次均以质粒DNA进行免疫;BCG组则注射PBS溶液2次后以BCG免疫。末次免疫后4、6、8周分别分离血清测定总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TBPPD刺激后进行淋巴细胞增殖实验（XTT法）并测定脾细胞培养上清中IFNγ和IL4水平。结果:DNA/BCG、DNA/DNA、BCG组体外经TBPPD刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,3组平均效价为1∶120、1∶160、1∶80,DNA/DNA组的抗体效价高于另外2组;小鼠脾细胞体外经TBPPD刺激后,均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFNγ反应,其中DNA/BCG组IFNγ的分泌水平高于DNA/D

3、NA组和BCG组（P<0.05）。结论:联合DNA疫苗初免—BCG加强的免疫策略能在小鼠体内诱导较强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFNγ。【关键词】结核分枝杆菌Ag85AESAT6异源初免—加强免疫　　[Abstract]AIM:ToparetheimmunogenicityofvaccinestrategiesaboutbinedDNAprimeBCGboostandDNAorBCGvaccinationonly.METHODS:BALB/cmiceice,andallmicereceivedthreeimmunizationsat2iceycobacterialan

4、tigens,ESAT6andantigen85Arespectively;andthenboostedofmiceinedphocytesofmiceulatedeasuretheirproliferationbyXTT,andtoevaluatetheproductionofinterferonr(IFNγ)andIL4incellsuspensionsofspleencellsbyELISA.RESULTS:PPDcouldstimulatespecificIgGresponsesinDNA/BCG,DNA/DNAandBCGgroups(DNA/DNAgroup>

5、DNA/BCGgroupandBCGgroup),andthemostsignificantresponseoccurredin12phocyteproliferationreactionsandIFNγandIL4productioningtuberculosis;Ag85A;ESAT6;heterologousprimebooststrategy　　自从1993年世界卫生组织（TB)的流行,MTB和HIV交叉感染,更加剧了结核的发病率和死亡率。卡介苗（BCG）作为传统的抗结核疫苗,其对成人的低保护作用和保护效率的不确定性,迫使我们研究寻找更为合适的疫苗或者更有效的免疫方法。

6、结核杆菌免疫保护性抗原基因的DNA疫苗是近年来研究较多的新型疫苗,但大量实验证明,DNA免疫后诱导的特异性免疫应答强度不能满足预防性和治疗性疫苗的要求,其所获得的抗结核杆菌攻击能力也低于BCG免疫的效果[1]。因此,改善DNA疫苗免疫方式从而提高其抗结核感染的效果就显得尤为重要。本研究中使用结核杆菌免疫保护性抗原Ag85A和ESAT6混合DNA疫苗进行初次免疫,再加以BCG加强免疫,对异源DNA初免—BCG加强免疫策略改善基因疫苗免疫效应的作用进行研究。　　1材料和方法　　1.1材料近交系BALB/c小鼠(24只,雌性,6～8周龄)由本校实验动物中心提供。pcESAT6是以pcDN

7、A3.1真核质粒为载体构建的表达型重组质粒,由本实验室构建[2]。结核杆菌H37Rv株基因组DNA由本实验室保存。DNA85A真核表达质粒构建如下。结核杆菌卡介苗上海株（BCG）,由成都生物制品研究所提供,本室常规培养。结核患者阳性血清,由四川大学华西附一院呼吸内科结核病房惠赠。EndofreePlasmidMiniKitII质粒小量抽提试剂盒及高纯度质粒提取试剂盒购自Omega公司;TBPPD（1mg/L）由北京祥瑞生物制品有限公司提供