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时间:2018-11-18
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1、猫爪草对耐多药结核分枝杆菌感染小鼠细胞免疫的作用论文【摘要】目的探讨猫爪草提取物对耐多药结核分枝杆菌(multipledrugsresistantbacillustuberculosis,MDR-TB)感染小鼠免疫功能的调节作用。方法采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染病理模型,将30只健康小鼠随机分为3组,每组12只,分为正常组、模型组和猫爪草提取物组;采用ELISA法检测小鼠血清中与结核细胞免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12含量的变化。结果猫爪草组与模型组比较,IFN-γ、IL-12含量明显升高,IL-4、IL-10含量明显下降(P0.05或P0
2、.01)。结论猫爪草提取物可以通过上调细胞因子增强小鼠的细胞免疫功能,为临床应用猫爪草治疗耐多药结核病提供了理论依据。【关键词】猫爪草提取物MDR-TB细胞因子免疫功能【Abstract】Objective:ToinvestigatetheregulativeeffectoftheextractofRadixRanunculiTernationcellularimmunityinducedbyMDR-TBinrats.Methods:MDR-TBmodelinratsalcontrolgroup,modelgroupandRadixRanunculiTernatigroupinedbyELIS
3、A.Results:paredtothemodelgroup,RadixRanunculiTernatigroupresultedinsignificantinserumIFN-γ,IL-12,IL-4andIL-10(P0.05orP0.01).Conclusion:TheextractofRadixRanunculiTernaticanenhancethecellarimmunologicalfunctioninrats,accordinglyprovidethetheorybaseofhealingoftuberculosismunologicalfunction结核病严重危害人类健康的
4、传染病之一,自20世纪80年代以来.freelg/ml的菌液,经尾静脉注射2ml菌量感染小鼠3。1.3中药提取物的制备将猫爪草中药粗粉,以水为溶剂加热回流提取,过滤,20%乙醇沉淀除去杂质,浓缩,冻干得水提取物;将同批次药材粗粉,以75%乙醇加热回流提取,浓缩,冻干得醇提取物4。1.4实验动物分组将30只小鼠随机分为3组,每组10只,雌雄各半。正常组每天正常标准饲料喂养,模型组生理盐水5ml灌胃,猫爪草提取物组灌服猫爪草中药醇提取物,每天按照浓度200mg/kg5ml灌胃,在再加入标准饲料,连续4周,第4周后处死动物,收取血清(将血液3000rpm×20min,取上清,灭活,过滤除菌)5。1.
5、5ELISA检测:按照IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的ELISA双抗体夹心试剂盒说明进行操作,将待测样品150ul分别加入到预先已用各抗小鼠IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12单克隆抗体包被的酶标板上;将反应板充分混匀后置37℃温箱120min,使标准品、待测样品中的抗原与单抗充分结合;洗板;每孔中加入生物素化的各一抗工作液50ul,置37℃温箱60min;洗板;每孔加辣根过氧化物酶标记的Streptavidin抗体工作液100ul,将反应板置37℃温箱60min,;洗板;每孔加入OPD(邻苯二胺)底物工作液100ul,置37℃暗处反应5-10min;每孔加入1滴终止液(
6、2MH2SO4)混匀;采用酶标仪在492nm处测各孔吸光度OD值。根据样品OD值在该曲线图上查出每ml组织匀浆中相应炎症因子的含量,再除以蛋白含量即为每mg组织蛋白中各细胞因子的含量。1.6资料统计分析:采用SPSS10.0系统进行分析。2结果2.1ELISA试验结果:见表1。表1各实验组小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的ELISA检测结果(x±s)Table1ResultsofIFN-γ,IL-4,IL-10和IL-12inseruminratsinbyELISA注:△P0.05,△△P0.01vs正常组;*P0.05,**P0.01vs模型组3讨论猫爪草2005年已被
7、《中国药典》收载,其名始见于《中药材手册》,原植物为毛茛科毛茛属植物小毛茛,为少用草药,历代本草未见收载。猫爪草是20世纪50年代河南信阳地区发现的一种新的验方药材,其性味甘、辛,性平,归肝、肺经。猫爪草以块根供药用,具有消肿、散结的功能6。目前临床上猫爪草提取物用于医治癌肿、淋巴结核等取得一定疗效,但具体的作用机制并不明确7,8。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌,以T细胞为主的细胞免疫为主。结核特
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