重组人源化兔抗vegf单克隆抗体的抗原结合活性测定_577

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1、重组人源化兔抗vEGF单克隆抗体的抗原结合活性测定范文红毕华饶春明*中国药品生物制品检定所重组技术产品室北京100050【摘要】目的采用直接ELISA法检测重组人源化抗vEGF单克隆抗体的抗原结合活性。方法以固定量的vEGF-Fc做包被抗原，辣根过氧化酶标记的抗人IgG（H+L）为二抗，直接测定不同浓度参考品和供试品与抗原的结合活性，通过数据处理软件对结果绘图，根据供试品及参考品EC50值计算供试品的相对结合力。结果重组人源化兔抗vEGF单抗供试品及参考品在该方法中均存在量效关系，且符合四参数方程。同一批次的供试品原液每次3支、分别经3次测定，相对结合活性分别为参比品的（90.43±1

2、8.74）%、（123.56±18.4）%和（106.83±18.47）%，平均值（106.94±16.57）%。3次试验的变异系数分别为20.72%、14.89%和17.29%。同一批次的供试品成品每次3只、分别经3次测定，相对结合活性分别为（97.34±18.42）%、（123.30±11.08）%和（93.91±4.57）%，变异系数分别为18.93%、8.96%和4.87%。结论直接ELISA法精密性良好，结果客观，影响因素少，可用于重组人源化兔抗vEGF单抗抗原结合活性的常规检测。【关键词】重组人源化兔抗vEGF单克隆抗体；相对抗原结合力；直接ELISA*通讯作者：饶春明（0

3、10）67095380,Email:raocm@nicpbp.org.cnMeasurementoftheAntigenBindingActivityoftheHumanizedAnti-vEGFRabbitMonoclonalAntibodyFanWenhong,BiHua,RaoChunming（DepartmentofRecombinantTechnologicalProducts,NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProductsofChina,Beijing100050）【Abstract】O

4、bjectiveTodeterminetheantigenbindingactivityofthehumanizedanti-vEGFrabbitmonoclonalantibodybydirectELISA.MethodsThereferenceandthesamplesofhumanizedanti-vEGFrabbitmonoclonalantibodywereseriallydilutedandallowedtoincubatewithafixedamountofrecombinantvEGF-Fc.TheEC50of7referencestandardandthesample

5、swouldbedeterminedbyfittinga4-parameterequation.ThebindingpotencyofthesampleswouldbeexpressedasapercentageoftheEC50tothatofthereferencestandard.ResultsTheaveragebindingpotencyofthehumanizedrabbitmonoclonalantibodybulkwas(106.94±16.57)%，from3timestestsof9vialsamplesofthesamebatch，whichmeettherequ

6、irementoftheirqualitycontrol.Theresultswere(90.43±18.74)%,(123.56±18.4)%and(106.83±18.47)%respectively.Therelativebindingpotencyofthefinalproductswere(97.34±18.42)%,(123.30±11.08)%and(93.91±4.57)%.TheCVsofthreetestsare18.93%,8.96%and4.87%respectively.ConclusionsTheresultsshowedthatdirectELISAisa

7、repeatableandstablemethodtodetecttherelativebindingaffinity.Themethodcouldbeusedasaroutineanalysisinthequalitycontrolofhumanizedanti-vEGFrabbitmonoclonalantibody.【Keywords】humanizedanti-vEGFrabbitmonoclonalantibody;relativeb