重组人肝活素（hps）的抗肝损伤活性研究

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1、＠庫乂夫蓉￥ＩＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中国第－所现代大学ＦＯＵＮＤＥＤＩＮ１８９５１４全日制ｊ：程硕±学位论文國誦Ｍ厕ｆｌ—■领域工程：瞧作者齡指导教肺？臟巧教授于森漏究员■９天津大学究生２０１５罢５心Ｊ；年月重组人肝活素（HPS）的抗肝损伤活性研究TheAnti-hepaticInjuryActivityofRecombinantHumanHepassocin学科专业：制药工程研究生：翟华立指导教师：杨晓明教授于淼副研究员天津大学化工学院二零一

2、五年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研巧成果，除了文中特别加标注和致谢之处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：３＾１签字日期：义年＾月乂日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

3、进行检。秦，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编供查阅和借阔同意学校向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名；导师签名：｜－－＞年：！年Ｓ月签字日期：＞＼＾含月ｙ％日签字日期户曼１／１曰摘要肝脏是人体内重要的功能器官，具有代谢、解毒、免疫、凝血等多种作用；但肝脏易受多种因素刺激，轻则导致肝功能紊乱，重则引起急性肝衰竭，甚至死亡。肝病在我国一直是一个严重的公共卫生问题，病毒、药物等导致的严重肝损伤(肝衰竭)都具有起病急、预后差、病死率高的特点，

4、目前临床上尚缺乏有效的治疗手段，研究并找到不仅可以阻止肝细胞坏死、而且能促进肝再生的药物一直是临床上面临的重大课题。Hepassocin(HPS)是一种具有肝脏组织特异性的促有丝分裂因子，通过自分泌循环的方式调节正常肝细胞的增殖，对CCl4、D-氨基半乳糖(D-galN)诱导的肝损伤具有较好的降酶保肝作用。本课题依据HPS的生物学特性，对HPS开展临床前抗肝损伤活性研究，包括动物模型评价和体外评价两部分：在动物模型评价方面，首先利用CCl4诱导的肝损伤模型确定HPS的给药方案即造模前12h，造模后24h、48h、72h给药，建立给药

5、谱，在此基础上研究HPS对此模型小鼠的保护作用，我们发现HPS能提高肝损伤小鼠的存活率，降低ALT、AST水平，HE染色结果表明HPS能降低肝组织坏死程度，酶联免疫吸附(TUNEL)结果显示HPS能减少肝细胞凋亡，增殖细胞核抗原(PCNA)结果表明HPS能促进肝细胞的增殖。通过D-galN/LPS诱导的肝损伤模型进一步评价HPS的活性，发现HPS同样可以降低小鼠的死亡率、转氨酶水平、肝组织坏死程度，Real-timePCR法检测凋亡及炎症因子的mRNA水平，CBA法检测血清中炎症因子的表达，证明HPS可降低相关凋亡及炎症因子的表达。

6、此外，本研究还评价了HPS对CCl4、D-galN诱导大鼠肝损伤、刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠肝损伤的保护作用。体外评价结果显示，HPS能促进小鼠原代肝细胞的增殖、降低CCl4处理对L02细胞的损伤。本研究检测了不同剂量CCl4诱导小鼠急性肝损伤及肝切除模型HPS在小鼠血清中的表达变化，并比较了HPS的表达与肝损伤程度的相关性，发现随着CCl4剂量的增加，小鼠死亡率显著升高，肝损伤程度增加，HPS在小鼠血清及肝组织中的表达水平也显著上调并与肝损伤程度密切相关；肝切除模型中HPS的血清表达上调。综上所述，HPS具有较好的抗肝损伤活性

7、，其在血清中的水平与肝损伤程度密切相关，因此，HPS可能会成为特异性治疗ALF的有效药物以及判断肝损伤程度的血清标志物。关键词：急性肝衰竭肝损伤肝活素标志物ABSTRACTLiverisanimportantorganwhichplaysmultiplebiologicalfunctionsinhumanbody,includingmetabolism,detoxification,immunizationandcoagulation.Meanwhile,liverisalsosensitivetovariousstimulatio

8、ns,whichwillinduceliverdysfunction,acuteliverfailure,andevendeath.Hepatopathyisalwaysapublichealthprobleminourcountry