基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体.pdf

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1、1SSN1007—8738细胞Lj分子免疫学杂志(ChinJCeltMollmmuno1)2010，26(7663·论著·文章编号：1007—8738(2010)07—0663—04基于抗原表位制备抗人GP'／3单克隆抗体姚西宁，霍景瑞，刘英富，刘保才，吴峰，范国才，王清明(蛋白质组学国家重点实验室军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京102206)Generationofmonoclonalantibodyt0[关键词]噬菌体展示；GP73；抗原表位；替代抗原[中图分类号]R392．11[文献标识码]BGP73basedonantigenepitopeGP73是一种相对分子质量(M)

2、约73000的位YAOXi—ning，HUOring—rui，LIUYing-fu，LIUBao—于高尔基体的Ⅱ型膜整合糖蛋白，是Kladney于2000cai，Feng，FANGuo—cai，WANGQing—ming年在研究成人巨大细胞性肝炎(giant—cellhepatitis，StateKeyLaboratoryofProteomics，BeijingProteomeResearchCenter，Beijingl02206，ChinaGCH)病原学时发现的一种新蛋白。在正常肝脏中，GP73仅表达于上皮细胞，肝细胞并不表达GP73。但[Abstract]AIM：Preparati

3、onofmonoclonalantibody是在急、慢性肝炎、肝硬化以及肝癌患者的肝细胞中(mAb)againstGP73protein．METHODS：TheN—terminalGP73的表达显著上调。Block等13发现，HBV相关peptide(AAAERGAVELK)ofGP73proteinwasdisplayed的肝癌患者的血清中GP73水平明显升高。MarreroonT7phage，therecombinantphagewasamplifiedand等进一步分析肝硬化患者和肝癌患者血清GP73usedastheimmunogentoimmunizemousetoproduc

4、eanti-水平，发现HCV相关的肝癌患者GP73水平显著高body．ThetiteroftheantiserumandthepositivehybridomacloneswhichsecretedthemAbagainstGP73proteinwere于肝硬化患者，Mao等对HBV相关的肝癌患者血detectedbyELISA．ThemAbspecificitywasassayedby清GP73的检测也得到了类似的结果。因此，GP73ELISAandWesternblot．RESULTS：Thehighspecificity被认为是一种可用于肝癌血清学诊断的候选标志物。mAbagain

5、stGP73proteinwasselectedfrOmthemouseim—为研究肝癌患者GP73表达水平，建立血清munizedwiththerecombinantT7phagesdisplayingtheGP73测定方法，有必要制备抗GP73的特异性单克epitopeofGP73bycellfusionandscreening．CONCLU-隆抗体(mAb)。本研究我们利用噬菌体抗原表位展SION：TheappropriateproteinepitopedisplayedonT7示技术，将GP73的N末端抗原表位展示于17噬菌phagecouldbeusedasalternativ

6、eantigentoimmunizeani‘体表面，用这种重组噬菌体作为替代抗原免疫小鼠，malstomakespecificantibodyagainstthecorrespondingn。获得了特异性识别GP73全蛋白的mAb，为下一步建ativeprotein．立GP73的检测方法奠定了基础。[Keywords]phagedisplay；GP73；epitope；alternativean。tigenl材料和方法[摘要]目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体(mAb)。1．1材料Sp2／0为本实验室保存；实验动物BALB／e小鼠方法：将GP73蛋白N末端的肽段(AAAERGAVELK

7、)展示于(6～8周龄，雌性，清洁级)购自军事医学科学院实验动物中1_7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗心；大肠杆菌BL21由本实验室保存；原核表达载体pGEX一4T一体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗2为Amersham公司产品；T7Select415一lb噬菌体载体为MerckGP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Westernblot等公司产品；基因组DNA提取试剂盒购自赛百盛公司