缺氧海马神经元中katp对基因bax表达的影响的论文

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1、缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响的论文【摘要】目的研究缺氧海马神经元中katp对基因bax表达的影响。方法对原代海马神经元进行缺氧和药物处理，倒置显微镜和nf免疫组织化学法观察细胞生长和形态，mtt法检测细胞凋亡率，rtpcr检测bax基因mrna表达水平。结果与单纯缺氧组比较，缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性(p<0.01)。缺氧+二氮嗪组中基因bax的mrna表达水平与单纯缺氧组相比下降(p<0.01)，缺氧+甲苯磺丁脲组中基因bax的mrna表达水平相对于单纯缺氧组也有提高(p<0.05)

2、。结论缺氧时katp的开放对细胞具有保护作用，它通过降低bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡。【关键词】katp;bax基因;缺氧;海马神经元abstract:objectivetostudytheeffectofkatpongenebaxinhippocampalneuronsunderhypoxiacondition.methodtheneuronsedicine.invertedmicroscopeandimmunohistochemistryofnfedtoassessthegroorphologyofthecells.cellviabilityeasuredtt

3、cellassay.rtpcrrnalevels.resultsparedultipolarneuronandsurvivalrateofprimaryculturedhippocampalneuronsindiazoxideandtolbutamideentsshornalevels(p<0.01)inneuronsculturedatseverehypoxiaconditionparedoxia.inhypoxiagroups,tolbutamideincreasedbaxmrnaexpression(p<0.05),palneuronsfromhypo

4、xiabysuppressingbaxexpression.　　keypalneuron　　atp敏感性钾通道广泛分布于中枢神经系统和其他外周组织中，调控多种生理活动。.缺氧作为一种重要的生理应激反应，自然也受到katp的调控，但其具体的机制还不是很清楚。bax是一种重要的细胞调节因子，其产物可以使线粒体释放细胞色素c，从而诱导细胞进入凋亡途径。本实验选取了katp特异性激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲[1]来处理常氧和缺氧时的神经元，观察katp通道的开关对于基因bax表达的影响，从而初步探讨katp对神经元保护的具体机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　实验动物出生

5、后1d的sd大鼠，雌雄不限，由南方医科大学实验动物中心提供，许可证号：scxk粤20060015。　　主要试剂dmem高糖培养液干粉(gibico);多聚赖氨酸10mg/l(sigma公司,usa);血清(杭州四季青公司);甲苯磺丁脲(sigma公司，usa);二氮嗪(sigma公司，usa);二步法免疫组化检测试剂盒(dako);trizol(invitrogen，usa);一步法rnapcr试剂盒(takara，japan)。　　1.2细胞培养　　取出生后1d的sd乳鼠，用体积分数75%的乙醇消毒，断头置于dhanks平衡盐溶液中。无菌条件下解剖出大鼠的大脑组织并

6、置于另一含有dhanks的器皿内。轻轻剔除脑膜及血管组织，进一步分离出双侧海马组织。移至含有dhanks的小青瓶内，剪成约1mm×1mm×1mm小块(以上步骤均在冰上操作)。加入5倍体积的1.25g/l胰酶(四季清)(37℃)，消化10min，中间轻轻振摇2～3次，用含体积分数20%fbs的dmem终止消化，400目筛网过滤，除去未消化完全的组织块。将过滤得到的细胞悬液移入离心管中，1000r/min离心5min。此时大部分的神经细胞已经沉淀到离心管底部，去除上层培养液，加入新培养液，用吸管轻轻吹打，重新悬浮细胞。将细胞浓度调至1×106个/ml左右，接种于包被有多聚

7、赖氨酸(10mg/ml，sigma)的培养板中，置于φ=5%的co2培养箱中培养(37℃)，48h后使用阿糖胞甘(arac)处理细胞48h，以去除其中的增殖细胞，以后每3天换液1次，每次换半量。使用的是含有体积分数10%胎牛血清(四季清)、青霉素1u/l单位和链霉素100mg/l单位(gibco)的dmemf12培养基(四季清)进行培养。　　1.3缺氧处理和分组　　实验分为6组。①常氧组：细胞于37℃孵育,并持续通以950ml/lo250ml/lco2混合气。②常氧+二氮嗪组：细胞培养7d左右时换为含有100μmol/l