缺氧海马神经元中katp对基因bax表达的影响论文

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1、缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响论文【摘要】目的研究缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响。方法对原代海马神经元进行缺氧和药物处理，倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态，MTT法检测细胞凋亡率，RTPCR检测Bax基因mRNA表达水平。结果与单纯缺氧组比较，缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性(P0.01)。缺氧+二氮嗪组中基因Bax的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比下降(P0.01)，缺氧+甲苯磺丁脲组中基因Bax的mRNA表达水平相对于单纯缺氧组也有

2、提高(P0.05)。结论缺氧时KATP的开放对细胞具有保护作用，它通过降低Bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡。【关键词】KATP;Bax基因;缺氧;海马神经元Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofKATPongeneBaxinhippocampalneuronsunderhypoxiacondition.MethodTheneuronsedicine.InvertedmicroscopeandimmunohistochemistryofNFedtoassessthegroorphologyof

3、thecells.CellviabilityeasuredRNAlevels.ResultsparedultipolarneuronandsurvivalrateofprimaryculturedhippocampalneuronsindiazoxideandtolbutamideentsshoRNAlevels(P0.01)inneuronsculturedatseverehypoxiaconditionparedoxia.Inhypoxiagroups,tolbutamideincreasedBaxmRNAexpressio

4、n(P0.05),palneuronsfromhypoxiabysuppressingBaxexpression.KeypalneuronATP敏感性钾通道广泛分布于中枢神经系统和其他外周组织中，调控多种生理活动。缺氧作为一种重要的生理应激反应.freelg/L(Sigma公司,USA);血清(杭州四季青公司);甲苯磺丁脲(Sigma公司，USA);二氮嗪(Sigma公司，USA);二步法免疫组化检测试剂盒(DAKO);Trizol(Invitrogen，USA);一步法RNAPCR试剂盒(Takara，Japan)。1.2细

5、胞培养取出生后1d的SD乳鼠，用体积分数75%的乙醇消毒，断头置于DHanks平衡盐溶液中。无菌条件下解剖出大鼠的大脑组织并置于另一含有Dhanks的器皿内。轻轻剔除脑膜及血管组织，进一步分离出双侧海马组织。移至含有Dhanks的小青瓶内，剪成约1mm×1mm×1mm小块(以上步骤均在冰上操作)。加入5倍体积的1.25g/L胰酶(四季清)(37℃)，消化10min，中间轻轻振摇2～3次，用含体积分数20%FBS的DMEM终止消化，400目筛网过滤，除去未消化完全的组织块。将过滤得到的细胞悬液移入离心管中，1000r/min

6、离心5min。此时大部分的神经细胞已经沉淀到离心管底部，去除上层培养液，加入新培养液，用吸管轻轻吹打，重新悬浮细胞。将细胞浓度调至1×106个/mL左右，接种于包被有多聚赖氨酸(10mg/mL，Sigma)的培养板中，置于φ=5%的CO2培养箱中培养(37℃)，48h后使用阿糖胞甘(AraC)处理细胞48h，以去除其中的增殖细胞，以后每3天换液1次，每次换半量。使用的是含有体积分数10%胎牛血清(四季清)、青霉素1U/L单位和链霉素100mg/L单位(Gibco)的DMEMF12培养基(四季清)进行培养。1.3缺氧处理和分组

7、实验分为6组。①常氧组：细胞于37℃孵育,并持续通以950mL/LO250mL/LCO2混合气。②常氧+二氮嗪组：细胞培养7d左右时换为含有100μmol/L二氮嗪的培养基，细胞于37℃孵育，并持续通以950mL/LO250mL/LCO2混合气。③常氧+甲苯磺丁脲组，细胞培养7d左右时换为含有100μmol/L甲苯磺丁脲的培养基，细胞于37℃孵育，并持续通以950mL/LO250mL/LCO2混合气。④缺氧组：细胞于37℃孵育，并通入950mL/LN250mL/LCO2混合气24h模拟缺氧。⑤缺氧加二氮嗪组：细胞培养7d

8、左右时换为含有100μmol/L的二氮嗪的培养基，37℃孵育，通入950mL/LN250mL/LCO2混合气24h模拟缺氧。⑥缺氧+甲苯磺丁脲：细胞培养7d左右时换为含有100μmol/L甲苯磺丁脲的培养基，37℃孵育，通入950mL/LN250mL/LCO