大鼠海马神经元中μ阿片受体、cck受体的表达及慢性吗啡作用对其表达的影响论文

《大鼠海马神经元中μ阿片受体、cck受体的表达及慢性吗啡作用对其表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠海马神经元中μ阿片受体、CCK受体的表达及慢性吗啡作用对其表达的影响论文【摘要】目的:研究MOR1，CCKAR，CCKBR在海马神经元的分布和吗啡对其受体的影响.方法：用激光共聚焦扫描技术，以神经元特异性标记抗体NF200对原代海马神经元进行鉴定，采用特异性的MOR1，CCKAR，CCKBR的抗体观察观察它们在海马神经元上的表达.选用雄性OR)，沈阳第一制药厂生产，批号：辽宁药准字(1996)第002747号.DMEM培养基、NeurobasalMedium，B27(美国Gibco

2、公司)；山羊抗CCKA，山羊抗CCKB抗体，兔抗MOR1多克隆抗体，FITCdonkeyantimouseIgG，BiotindonkeyantirabbitIgG(美国SantaCruz公司)；TRITCrabbitantigoatIgG，FITCrabbitantigoatIgG，FITCgoatantirabbitIgG(北京中山生物公司)；CY5antirabbitIgG(Camical公司)；小鼠抗NF200单克隆抗体(NEOMARKERS公司)；兔抗胶质纤维

3、酸性蛋白（GFAP）多克隆抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)；激光共聚焦显微镜(德国Leica)；EpicsXL流式细胞仪(美国BeckmanCoulter).1.2方法1.2.1原代大鼠海马神经元培养取出生1d的大鼠在无菌条件下分离海马组织，制备细胞悬液，用含B27Supplement的NBM进行原代海马神经元培养.1.2.2神经元鉴定取培养6d的大鼠海马神经元，用免疫荧光标记技术进行鉴定，一抗分别为GFAP多克隆抗体和NF200单隆抗体，二抗分别为Biotindonkeyantirab

4、bitIgG＋CY5antidonkeyIgG和FITCdonkeyantimouseIgG，标记后选择不同视野细胞进行激光共聚焦扫描40ｘ（激发波长488nm，发射波长530nm）.1.2.3MOR1，CCKAR，CCKBR在海马神经元的表达将原代海马神经元随机分为NF200/MOR1，NF200/CCKAR，NF200/CCKBR3组，特异性抗体同上，用免疫荧光标记和激光共聚焦扫描技术检测受体的表达.1.2.4MOR1，CCKAR，CCKBR在吗啡处理大鼠海马神经元的表达

5、1.2.4.1给药与分组60只健康雄性1～M9组（分别给予MOR1~9d），大鼠参照文献［5］以剂量递增法背部皮下给予吗啡，首日吗啡20mg/kg，分2次皮下注射(8:00,18:00).以后每日增加20mg/kg，9d8:00末次注射吗啡1h后取大鼠海马.每组n=6.1.2.4.2大鼠海马神经元的分离及检测9d08:00末次注射吗啡1h，按照本实验室方法分离海马［6］，制备细胞悬液，台盼蓝染色鉴定细胞活性大于95％.无血清DMEM调整细胞浓度至2×106/mL，用流式细胞仪随机测定单个细胞的荧光强度

6、值（激发波长488nm，发射波长530nm）.每份标本10000个细胞的平均荧光强度值为测定值，用以反映受体蛋白表达.统计学处理：实验数据用x±s表示.用SPSS13.0统计分析软件进行统计学分析.各组均数的比较采用Duntt检验进行两两比较，将CCKAR与CCKBR作为整组采用配对T检验对两组间进行比较，P0.05为有统计学差异.2结果2.1体外培养海马神经元的鉴定结果显示：NF阳性细胞标记绿色荧光，GFAP标记蓝色荧光，在整张盖片，NF阳性细胞90％以上，同时有散在的GFAP阳性细胞(图1)

7、.2.2MOR1,CCKAR及CCKBR在海马神经元的表达在海马神经元膜，轴突和树突上均有发蓝色荧光的MOR1阳性表达产物（图2A，D）；绿色荧光标记物与红色荧光标记物重叠之后呈橙黄色荧光，CCKA,CCKB受体呈橙黄色标记,在海马神经元膜表面广泛分布（图2B，C，E，F）.2.3吗啡对大鼠海马神经元MOR1,CCKAR,CCKBR表达的影响采用流式细胞技术检测给予吗啡后MOR1，CCKAR，CCKBR在海马神经元上的表达.给予吗啡2d时MOR1上调(P0.05)，5d时MO

8、R1开始出现下调，蛋白表达量显著下降(P0.01)，并呈时间依赖性.给药2d，CCKB受体的荧光强度值较对照组相比显著升高(P0.05).给药5d，CCKA受体的荧光强度值较对照组显著升高(P0.01，表1).同一时间点CCKB受体的荧光值高于CCKA受体(P0.01，表1).表1吗啡对大鼠海马神经元MOR1,CCKB和CCKA受体表达的影响(略)3讨论阿片类物质长期作用会引起细胞的一些适应性改变，如阿片受体下调、内吞以及环磷酸腺苷(cA