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时间:2018-05-08
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1、沙枣黄酮的提取及其抗氧化作用的研究的论文作者:李红,郅洁,马彦梅,李炳奇,刘红,龚晓武【摘要】目的对沙枣黄酮的抗氧化作用进行研究。方法以70%乙醇为溶剂,超声辅助法提取沙枣中的黄酮,用比色法测定其含量为0.928%;采用比色法测定沙枣黄酮对·oh、o-2·和dpph·等3种自由基的清除作用。结果沙枣黄酮对3种自由基都有明显的清除作用,清除能力为dpph·>o-2·>·oh。结论清除率与浓度存在明显的量效关系,当浓度为0.4mg·ml-1时,其清除率·oh为76.07%,o-2·为79.53%,dpph·为93.91%。【关键词】沙枣;黄酮;抗氧化性沙枣elae
2、agnusangustifolial.t属胡颓子科(elaeagnaceae)胡颓子属(elaeaglltl.),耐盐碱、生长快、易繁殖,药用价值高,在新疆的塔克拉玛干沙漠及各河流沿岸(且末、若羌、民丰、英吉沙、阿克苏)和伊犁、托克逊等地广泛分布[1]。酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[2,3]。.近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。但是关于沙枣黄酮抗氧化方面的研究尚未见报道。本研究将沙枣黄酮对3种不同
3、自由基的清除能力进行了一个较为全面、系统的研究,从而探讨沙枣黄酮的抗氧化作用,为进一步筛选天然植物抗氧化剂奠定了一定的基础。 1材料 1.1试剂乙醇(a.r),氢氧化钠(a.r),亚硝酸钠(a.r),硝酸铝(a.r),ph8.2tris-hcl缓冲液(a.r),0.02%双氧水(a.r);7mmol·l-1邻苯三酚(a.r);ph7.4磷酸盐缓冲溶液(pbs,a.r);1.5mmol·l-1邻二氮菲(a.r);2×10-4mol·l-1的dpph(二苯基苦基苯肼,sigma公司生产)。 1.2仪器tdl-5型低速台式离心机(上海隆拓仪器设备有限公司);赛多利斯电子天
4、平(德国sartorius);岛津uv-2401pc型紫外分光光度计(日本岛津公司生产);r-200型旋转薄膜蒸发器(瑞士buchi);eppendorf手动可调程单道移液器(德国艾本德股份公司);dl-360a型超声波清洗器(上海之信仪器有限公司);shz-c型循环水真空泵(河南豫华仪器有限公司);hh-s型恒温水浴锅(陕西太康生物科技有限公司)。 2方法 2.1黄酮的含量测定方法 2.1.1对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品适量,用甲醇溶解,定容于50ml容量瓶中,制得浓度为0.2mg·ml-1的对照品溶液。 2.1.2最大吸收峰的确定精确吸取芦丁对照品溶液2
5、ml,加5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀后静置6min,加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀后静置6min,加10%氢氧化钠溶液4.0ml,用蒸馏水定容至10ml,摇匀,放置15min,于400~600nm波长处扫描,结果在510nm处有最大吸收。 2.1.3标准曲线的绘制精确吸取0.20mg·ml-1芦丁对照品溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀,放置6min,再加入10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀,放置6min,最后加入10%氢氧化钠溶液4.0ml,用蒸馏水定容至10ml,摇匀,放置15min,在510nm处测定
6、其吸光度值。以吸收度为纵坐标,对照品溶液的浓度(mg·ml-1)为横坐标,得线性回归方程:y=9.735x-0.0115,r=0.9999。 2.1.4黄酮的提取准确称取粉末30.00g,按料液比1∶10加入70%乙醇浸泡30min,超声提取1h,过滤后得滤液和滤渣。滤渣再按上述方法提取2次,浓缩,定溶至50ml容量瓶,作为试样液。 2.1.5黄酮的含量测定取试样液2ml于10ml容量瓶中,加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6min;再加入10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,放置6min;最后加入10%氢氧化钠溶液4.0ml,用蒸馏水定容至10ml,摇匀,放置1
7、5min;在510nm处测定其吸光度值。根据标准曲线计算得沙枣果肉黄酮含量为0.928%。 2.2自由基的生成及清除率的测定 2.2.1羟自由基的生成及清除率的测定[4]精密量取2.0mlpbs磷酸盐缓冲溶液(ph=7.4,下同)和4.0ml蒸馏水于试管中,混匀作空白参比管;精密量取2.0mlpbs,1.0ml邻二氮菲(1.5mmol·l-1,下同)、1.0mlfeso4(1.5mmol·l-1,下同)和2.0ml蒸馏水于试管中,混匀作未损伤管;精密量取2.0mlpbs,1.0ml邻二氮菲,1.0mlfeso4,1.0ml
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