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1、正交实验法优选沙枣花总黄酮提取工艺及沙枣花醇提物体外抗氧化活性的研究论文王基云，陆钊罡，王丹，肖旭，张振华，姚遥，王锐，王妍【摘要】目的研究提取沙枣花(elaeagnusangustifoliablossoms.freels，AE-EAB)清除氧自由基的作用。方法以芦丁为对照品,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色体系作为显色剂,采用正交实验方法对沙枣花总黄酮提取方法进行了系统研究。结果最佳提取工艺为20倍量70%乙醇回流3次,1h/次。AE-EAB对氧自由基的清除作用随着浓度的升高而增强。结论EAB总黄酮的最佳提取工艺为A2B2C1D3。AE-EAB对氧自由基有清除作用.
2、【关键词】沙枣花;总黄酮;紫外分光光度法;正交实验;氧自由基Abstract：ObjectiveTostudytheoptimalextractiontechnologyoftotalflavonoidsinElaeagnusangustifoliablossoms(EAB),andthefreeradicalsscavengingeffectofthealcoholextractofElaeagnusangustifoliablossoms(AE-EAB).MethodsUsingRutinastheevaluatingcriteriaandNaNO2-Al(NO3)3-NaO
3、Haschromogenicagent,theextractionconditionaltechnologicalconditionsentasfolloe20mlfor1gEABeverytime,andextractingfor3times(40minforeachtime).ThescavengingeffectonoxygenfreeradicalumextractiontechnologyisA2B2C1D3.AE-EABhasscavengingeffectonoxygenfreeradical.Keyg,置于25ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解，放冷，加甲
4、醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。2.1.2标准曲线的制备精密吸取标准溶液1，2，3，4，5，6ml置25ml量瓶中,各加亚硝酸钠溶液1.00ml,混匀,放置显色6min,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程Y=10.316X-0.0026,相关系数r=0.9992,线性关系良好。见表1，图1。表1标准曲线测定
5、数据图1芦丁浓度-吸光度标准曲线2.1.3供试品溶液制备取本品粗粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，转移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。紧密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加亚硝酸钠”起依法测定吸光度。2.1.4稳定性实验精密吸取对照品溶液和供试品溶液各3ml置25ml容量瓶,分别按照“2.1.2”项中“加亚硝酸钠溶液1.00ml”起,至“加氢氧化钠试液10ml
6、,再加水至刻度，摇匀，放置”操作,用以同样方法加入显色剂的溶剂作空白,分别在2,5,15,30,45,60min测定吸收度,结果表明,对照品吸收度RSD=0.764(n=6),样品吸收度RSD=4.556,说明稳定性较好。结果见表2。表2稳定性实验结果2.1.5精密度实验精密吸取同一份对照品和供试品溶液各5份,每份3ml置25ml容量瓶,按照“2.1.2项中“加亚硝酸钠溶液1.00ml”起,至“加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置”操作,用以同样方法加入显色剂的溶剂作空白,测定吸收度,结果表明,对照品吸收度RSD=0.185%(n=5),样品吸收度RSD=4.141%
7、(n=5),说明精密度较好。数据见表3。2.1.6重复性实验精密称定同一批沙枣花粉末5份各1.0g,按照“供试品溶液的制备”方法制得供试品溶液,测定吸收度,结果表明,RSD=4.214,说明重复性较好。结果见表4。表3精密度实验结果表4重复性实验结果2.1.7加样回收率实验取已知总黄酮含量的沙枣花粉末(含总黄酮13.41%)3份,每份1g,精密称定,然后照“供试品溶液的制备”项下进行制备，制备后各取3ml，同时分别加入已知浓度的芦丁标准液1.0,2.0,3.0ml，依照上述样品测
