沙枣黄酮的提取及其抗氧化作用的研究

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1、沙枣黄酮的提取及其抗氧化作用的研究作者：李红，郅洁，马彦梅，李炳奇，刘红，龚晓武【摘要】目的对沙枣黄酮的抗氧化作用进行研究。方法以70%乙醇为溶剂，超声辅助法提取沙枣中的黄酮，用比色法测定其含量为%；采用比色法测定沙枣黄酮对·OH、O-2·和DPPH·等3种自由基的清除作用。结果沙枣黄酮对3种自由基都有明显的清除作用，清除能力为DPPH·>O-2·>·OH。结论清除率与浓度存在明显的量效关系，当浓度为·ml-1时，其清除率·OH为%，O-2·为%，DPPH·为%。【关键词】沙枣；黄酮；抗氧化性沙枣Elaeagnusangustifolia属胡颓子科(Elaeagnaceae)胡颓子属(El

2、aeaglltL.)，耐盐碱、生长快、易繁殖，药用价值高，在新疆的塔克拉玛干沙漠及各河流沿岸(且末、若羌、民丰、英吉沙、阿克苏)和伊犁、托克逊等地广泛分布［1］。酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［2,3］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。但是关于沙枣黄酮抗氧化方面的研究尚未见报道。本研究将沙枣黄酮对种不同自由基的清除能力进行了一个较为全面、系统的研究，从而探讨沙枣黄酮的抗氧化作用，为进一步筛选天然植物抗氧化剂奠定了一

3、定的基础。1材料试剂乙醇()，氢氧化钠()，亚硝酸钠()，硝酸铝()，缓冲液()，%双氧水()；mmol·L-1邻苯三酚()；磷酸盐缓冲溶液。1.仪器TDL-5型低速台式离心机；赛多利斯电子天平；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计；R-200型旋转薄膜蒸发器；eppendorf手动可调程单道移液器；DL-360A型超声波清洗器；SHZ-C型循环水真空泵；HH-S型恒温水浴锅。方法.1黄酮的含量测定方法.对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品适量，用甲醇溶解，定容于50ml容量瓶中，制得浓度为·ml-1的对照品溶液。.最大吸收峰的确定精确吸取芦丁对照品溶液ml,加5%亚硝酸钠溶液，摇匀后静置

4、min，加10%硝酸铝溶液，摇匀后静置min，加10%氢氧化钠溶液ml，用蒸馏水定容至10ml，摇匀，放置1min，于400～600nm波长处扫描，结果在510nm处有最大吸收。.标准曲线的绘制精确吸取mg·ml-1芦丁对照品溶液，，，，，ml，分别加入5%亚硝酸钠溶液摇匀，放置min，再加入10%硝酸铝溶液摇匀，放置min，最后加入10%氢氧化钠溶液ml，用蒸馏水定容至10ml，摇匀，放置1min，在510nm处测定其吸光度值。以吸收度为纵坐标，对照品溶液的浓度为横坐标，得线性回归方程：Y=-，r=。.黄酮的提取准确称取粉末g，按料液比1∶10加入70%乙醇浸泡30min，超声提取1h，

5、过滤后得滤液和滤渣。滤渣再按上述方法提取2次，浓缩，定溶至50ml容量瓶，作为试样液。.黄酮的含量测定取试样液ml于10ml容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置min；再加入10%硝酸铝溶液，摇匀，放置min；最后加入10%氢氧化钠溶液ml，用蒸馏水定容至10ml，摇匀，放置1min；在510nm处测定其吸光度值。根据标准曲线计算得沙枣果肉黄酮含量为%。.2自由基的生成及清除率的测定.羟自由基的生成及清除率的测定［4］精密量取mlPBS磷酸盐缓冲溶液(pH=，下同)和ml蒸馏水于试管中，混匀作空白参比管；精密量取mlPBS，ml邻二氮菲(·L-1，下同)、mlFeSO4(·L-1，下

6、同)和ml蒸馏水于试管中，混匀作未损伤管；精密量取mlPBS，ml邻二氮菲，mlFeSO4，ml蒸馏水和mlH2O2(%)于试管中，混匀作损伤管；精密量取mlPBS，ml样品液和ml蒸馏水于试管中，混匀作样品参比管；精密量取mlPBS、ml邻二氮菲，mlFeSO4，ml黄酮试样液和mlH2O2于试管中，混匀作样品管。将上述试管置于恒温水锅中，37℃保温60min，于波长53nm处测吸光度(A)值，每种处理重复5次，用其平均值按下式计算羟自由基清除率。以VitC作对照。　　羟自由基清除率=［(A样品-A样参)-(A损伤-A空参)］/(A未损-A损伤)×100%.超氧阴离子自由基的生成及清除率

7、的测定［5］采用邻苯三酚自氧化法，精密量取Tris-HCl缓冲溶液(50mmol·L-1，)和ml药液于试管中，混匀后在室温下平衡min，然后于32nm处测定吸光值Aj；精密量取Tris-HCl缓冲溶液向其中加入ml邻苯三酚，反应平衡min，于32nm处测得反应体系的吸光值A0。按照上述方法，精密量取Tris-HCl缓冲溶液和ml药液，混匀后在室温下放置min，立即加入ml邻苯三酚并开始计时，以10mmol·L-1HCl