尿多酸肽（cda2）诱导多发性骨髓瘤细胞rpmi8226凋亡的实验研究

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1、尿多酸肽（CDA2）诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究：叶宝东沈一平周郁鸿邵科钉俞庆宏【摘要】　　［目的］观察尿多酸肽（CDA2）对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226抑制增殖和凋亡作用。［方法］应用MTT法，检测CDA2对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响。通过Hochest33258染色、流式细胞仪（AnnexinV和PI双染色）检测细胞凋亡。［结果］CDA2明显抑制RPM18226细胞的增殖。CDA2作用RPM18226细胞增殖24h的半数抑制浓度（IC50）分别为1.64mg/g。采用Hochest33258染色，荧光显微镜下观察CDA2以2mg/

2、g及4mg/g终浓度作用于RPM1822624h后细胞形态改变，可见明显的凋亡小体出现。AnnexinVPI双标记法流式细胞仪分析结果显示，RPMI8226细胞2mg/gCDA2作用6、12、24h后，早期凋亡细胞百分数分别为5.43%、12.02%、29.07%，明显高于空白对照组4.88%。［结论］CDA2对MM细胞株RPMI8226有生长抑制作用，可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。【关键词】多发性骨髓瘤；尿多酸肽；细胞凋亡　　Abstract：［Objective］Toinvestigatetheproliferationinhibitionandapoptosisinduc

3、ingeffectofuroacitides（CDA2）onhumanmultiplemyelomaRPMI8226cells.［Methods］MTTassayetry（AnnexinVandPIstaining）.［Results］MTTanalysisindicatedthattheproliferationofRPMI8226cellsentfor24h.Treatmentg/g.Cellappearancesg/gand4mg/g）forRPMI8226，icroscope.Aftertreatmentg/g）for6h，12h，24h，RPMI8226had5.43%，12.

4、02%and29.07%apoptoticcells，orethanthatofuntreatedgroup（4.88%）.［Conclusions］Uroacitides（CDA2）couldinhibittheproliferationandinduceapoptosisofhumanmultiplemyelomaRPMI8226cellsinvitro.　　Keyultiplemyeloma；CDA2；cellapoptosis尿多酸肽（CDA2）是从健康人尿中提取的含有多种有机酸和多肽成分的非细胞毒性新型诱导分化治疗抗癌药［1］。近年来的研究表明，CDA2对多种肿瘤细胞具有

5、诱导分化和凋亡作用，而且还可以逆转肿瘤耐药，防止肿瘤复发和转移［2］。但对多发性骨髓瘤（MultipleMyeloma，MM）的作用尚未见报道，我们观察了CDA2对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的作用，并初步从诱导凋亡角度探讨其作用机制，为临床应用CDA2治疗提供多发性骨髓瘤实验依据。　　1材料和方法　　1.1细胞株　　人多发性骨髓瘤细胞株：RPM18226（浙江大学第一附属医院血液研究所惠赠）。　　1.2主要试剂及药品　　CDA2由台湾信东化学工业公司廖明徵博士馈赠（原药，药物浓度为278mg/ml），实验前用RPMI1640培养液稀释成所需浓度。RPMI1640，胎牛血

6、清（FBS）：GIBCO公司；四甲基偶氮哇蓝（3（4，5dimethylthiazol2yl）2，5diphemyltetrazoliumBromide，MTT）：Sigma公司；Hochest33258染料：美国BD公司；PI试剂盒：Sigma公司，4℃保存；AnnexinVFITC细胞凋亡检测试剂盒：美国CALTAG公司。　　1.3RPMI8226细胞株的培养　　多发性骨髓瘤细胞RPMI8226用含体积分数为10%热灭活小牛血清（56℃，灭活30min）的RPMI1640培养基，置37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中常规培养。每2～4d传代1次，取对数生长期细胞进行实验

7、。　　1.4MTT比色法检测细胞增殖　　取对数生长期细胞，新鲜培养液洗涤后，重悬于含体积分数为10%FBS的RPMI1640培养液中，以5×105个细胞/ml接种于96孔培养板，加入不同浓度药物，空自对照组以无血清RPMI1640补足，每孔总体系0.2m1，分别处理24、48h，加MTT工作液20μl/孔（终浓度0.5mg/ml），置37℃，体积分数为5%CO2培养箱中孵育4h，1000rpm/min离心，小心吸去上清，