尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞(k562)株凋亡及与亚砷酸的协同作用

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1、河北医科大学硕士学位论文尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞（K562）株凋亡及与亚砷酸的协同作用姓名：宋辉申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李峰敏201203中文摘要尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞(K562)株凋亡及与亚砷酸的协同作用摘要目的：观察尿多酸肽(CDA．2)、亚砷酸、CDA．2与亚砷酸联合体外诱导慢性髓细胞白血病细胞(K562)株凋亡、抑制增殖的作用；探讨CDA．2与亚砷酸联合对诱导K562细胞凋亡及抑制增殖的协同作用，以及发挥协同作用的时间、单药浓度及强度，获得与单药相同作用时的联合用

2、药的单药浓度，指导临床用药，减少不良反应，降低费用。慢性髓细胞白血病(CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病，到目前为止仍然不可治愈。其发病机制为t(9；22)(q34；ql1)突变，形成bcr／abl融合基因。进而编码bcr／abl融合蛋f兰l(P210)，激活并增强酪氨酸激酶(PTK)活性，导致K562细胞凋亡受抑，白血病细胞在体内大量积聚。尽管各种酪氨酸激酶(PTK)抑制剂及造血干细胞移植提高了CML的治愈率以及生活质量，但广泛耐药及不良反应、增加的经济负担不可逾越。尿多酸肽(Uroac

3、itides)，又称细胞分化剂．2(celldifferentiationagent．2，CDA．2)，是含有有机酸、小分子多肽和氨基酸的混合物，经由健康人尿酸化、超滤、树脂分离后所得。基础研究显示CDA．2不仅能诱导多种肿瘤细胞凋亡和分化，而且可以逆转肿瘤耐药、防止肿瘤复发和转移，增强放化疗敏感性。I、II、III期临床试验及临床应用证明，对多种肿瘤有良好的效果，且不良反应小。作为一种新型的诱导分化剂，已应用于各种实体瘤及血液系统恶性疾病的治疗。亚砷酸，又称三氧化--'lie(As203)，是诱导分化剂

4、的一次革命，在治疗急性早幼粒细胞白血病上取得了举世瞩目的成绩。而且基础研究及临床实践证实，亚砷酸对CML、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等有一定的治疗作用。但是，对CML的治疗效果以及不良反应，限制了其应用。因此，提高亚砷酸对CML的疗效，控制急性和慢性不良反应日益受到关注。临床及实验证实亚砷酸不良反应与剂量存在明显的相关性，因此，增强亚砷酸的诱导分化作用，控制其不良反应，适当减少剂量是关键措施之一。中文摘要诱导分化剂开辟了血液系统恶性疾病治疗的新途径，治疗作用不断强化，适用范围不断扩展。而针对性不强及药物不良

5、反应、经济条件不足，以及开发和利用新的诱导分化剂的漫长过程，很难满足临床的需要，因此联合目前的诱导分化剂，提高疗效、减少药物不良反应、减轻经济负担是基础及临床研究者面临的重要课题和严峻挑战。方法：不同浓度的尿多酸肽、亚砷酸及二者联合处理K562细胞株，通过台盼蓝拒染法和MTT比色法检测K562细胞增殖抑制率和细胞生长率；应用倒置相差显微镜、AO荧光染色观察细胞凋亡及形态学变化；应用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：lK562细胞形态的观察倒置相差显微镜：随着尿多酸肽、亚砷酸及二者联合用药浓度的增加及作用时间的

6、延长，K562细胞皱缩变小，核固缩呈均匀的致密物，细胞膜出现伪足样突起，细胞折光性差，最后细胞膜不完整，形成细胞碎片。联合用药组比相同浓度的单药组凋亡及坏死细胞增多。荧光染色：未经药物处理的对照组为正常活细胞，圆形，核呈黄绿色均匀荧光，胞质呈橘红色荧光。凋亡细胞可见核呈黄绿色致密浓聚在核膜内侧，胞膜呈泡状膨出，细胞形态不规则，可见黄绿色碎片。2台盼蓝拒染法检测K562细胞增殖抑制率，死细胞被染成蓝色，而活细胞拒染。2．1尿多酸肽组：相同作用时间，随着尿多酸肽浓度的增加，细胞增殖抑制率升高；同一浓度的尿多酸

7、肽，随作用时间的延长，细胞增殖抑制率升高。但62．5mg／L的尿多酸肽，各时间段细胞增殖抑制率无差异(胗0．05)。通过SPSS软件测得，尿多酸肽作用K562细胞24小时、48小时、72小时的IC50值分别为75mg／L、59mg／L、37mg／L。2．2亚砷酸组：不同浓度亚砷酸，随着药物浓度的增加，对细胞增殖抑制率呈剂量依赖性增加；同一浓度的亚砷酸，随作用时间延长，对细胞增殖抑制率呈时间依赖性增加。其中，相同作用时间组中0．251amol／L的亚砷酸和O．501．tmol／L的亚砷酸对K562细胞的增殖

8、抑制率影响无差别(P>0．05)，余各浓度之间均存在差异，有统计学意义(尸