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时间:2019-02-23
《尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞(k562)株凋亡及与亚砷酸的协同作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、河北医科大学硕士学位论文尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞(K562)株凋亡及与亚砷酸的协同作用姓名:宋辉申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:李峰敏201203中文摘要尿多酸肽诱导慢性髓细胞白血病细胞(K562)株凋亡及与亚砷酸的协同作用摘要目的:观察尿多酸肽(CDA.2)、亚砷酸、CDA.2与亚砷酸联合体外诱导慢性髓细胞白血病细胞(K562)株凋亡、抑制增殖的作用;探讨CDA.2与亚砷酸联合对诱导K562细胞凋亡及抑制增殖的协同作用,以及发挥协同作用的时间、单药浓度及强度,获得与单药相同作用时的联合用
2、药的单药浓度,指导临床用药,减少不良反应,降低费用。慢性髓细胞白血病(CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病,到目前为止仍然不可治愈。其发病机制为t(9;22)(q34;ql1)突变,形成bcr/abl融合基因。进而编码bcr/abl融合蛋f兰l(P210),激活并增强酪氨酸激酶(PTK)活性,导致K562细胞凋亡受抑,白血病细胞在体内大量积聚。尽管各种酪氨酸激酶(PTK)抑制剂及造血干细胞移植提高了CML的治愈率以及生活质量,但广泛耐药及不良反应、增加的经济负担不可逾越。尿多酸肽(Uroac
3、itides),又称细胞分化剂.2(celldifferentiationagent.2,CDA.2),是含有有机酸、小分子多肽和氨基酸的混合物,经由健康人尿酸化、超滤、树脂分离后所得。基础研究显示CDA.2不仅能诱导多种肿瘤细胞凋亡和分化,而且可以逆转肿瘤耐药、防止肿瘤复发和转移,增强放化疗敏感性。I、II、III期临床试验及临床应用证明,对多种肿瘤有良好的效果,且不良反应小。作为一种新型的诱导分化剂,已应用于各种实体瘤及血液系统恶性疾病的治疗。亚砷酸,又称三氧化--'lie(As203),是诱导分化剂
4、的一次革命,在治疗急性早幼粒细胞白血病上取得了举世瞩目的成绩。而且基础研究及临床实践证实,亚砷酸对CML、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等有一定的治疗作用。但是,对CML的治疗效果以及不良反应,限制了其应用。因此,提高亚砷酸对CML的疗效,控制急性和慢性不良反应日益受到关注。临床及实验证实亚砷酸不良反应与剂量存在明显的相关性,因此,增强亚砷酸的诱导分化作用,控制其不良反应,适当减少剂量是关键措施之一。中文摘要诱导分化剂开辟了血液系统恶性疾病治疗的新途径,治疗作用不断强化,适用范围不断扩展。而针对性不强及药物不良
5、反应、经济条件不足,以及开发和利用新的诱导分化剂的漫长过程,很难满足临床的需要,因此联合目前的诱导分化剂,提高疗效、减少药物不良反应、减轻经济负担是基础及临床研究者面临的重要课题和严峻挑战。方法:不同浓度的尿多酸肽、亚砷酸及二者联合处理K562细胞株,通过台盼蓝拒染法和MTT比色法检测K562细胞增殖抑制率和细胞生长率;应用倒置相差显微镜、AO荧光染色观察细胞凋亡及形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:lK562细胞形态的观察倒置相差显微镜:随着尿多酸肽、亚砷酸及二者联合用药浓度的增加及作用时间的
6、延长,K562细胞皱缩变小,核固缩呈均匀的致密物,细胞膜出现伪足样突起,细胞折光性差,最后细胞膜不完整,形成细胞碎片。联合用药组比相同浓度的单药组凋亡及坏死细胞增多。荧光染色:未经药物处理的对照组为正常活细胞,圆形,核呈黄绿色均匀荧光,胞质呈橘红色荧光。凋亡细胞可见核呈黄绿色致密浓聚在核膜内侧,胞膜呈泡状膨出,细胞形态不规则,可见黄绿色碎片。2台盼蓝拒染法检测K562细胞增殖抑制率,死细胞被染成蓝色,而活细胞拒染。2.1尿多酸肽组:相同作用时间,随着尿多酸肽浓度的增加,细胞增殖抑制率升高;同一浓度的尿多酸
7、肽,随作用时间的延长,细胞增殖抑制率升高。但62.5mg/L的尿多酸肽,各时间段细胞增殖抑制率无差异(胗0.05)。通过SPSS软件测得,尿多酸肽作用K562细胞24小时、48小时、72小时的IC50值分别为75mg/L、59mg/L、37mg/L。2.2亚砷酸组:不同浓度亚砷酸,随着药物浓度的增加,对细胞增殖抑制率呈剂量依赖性增加;同一浓度的亚砷酸,随作用时间延长,对细胞增殖抑制率呈时间依赖性增加。其中,相同作用时间组中0.251amol/L的亚砷酸和O.501.tmol/L的亚砷酸对K562细胞的增殖
8、抑制率影响无差别(P>0.05),余各浓度之间均存在差异,有统计学意义(尸
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