苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226凋亡的实验研究

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1、苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡的实验研究【摘要】　　本研究探讨苦参碱对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用及其机制。用不同浓度苦参碱处理RPMI8226细胞24、48小时，通过形态学观察、AnnexinV分析、DNA琼脂糖电泳、线粒体膜电位检测观察苦参碱对RPMI8226细胞的促凋亡作用。结果表明：RPMI8226细胞经苦参碱处理后，出现典型的细胞凋亡形态，凋亡早期细胞膜外翻，DNA琼脂糖电泳出现典型的梯状结构，线粒体膜电位崩塌。结论：苦参碱能有效地诱导骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡，凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性。【关键词】苦参碱多发性骨

2、髓瘤RPMI8226细胞株细胞凋亡　　ApoptosisofMultipleMyelomaRPMI8226CellLineInducedbyMatrineAbstractThisstudyedtoinvestigatetheeffectofmatrineonmultiplemyelomaRPMI8226celllineanditsmechanism.TheRPMI8226cellsatrinefor24and48hours;thepromotingapoptosiseffectofmatrineonRPMI8226cellsorphology,AnnexinVana

3、lysis,DNAagarosegelelectrophoresis,mitochondrialtransmembranepotentialdetection,etc.TheresultsindicatedthataftertreatmentofRPMI8226cellsatrine,thetypicalmorphologyofcellapoptosisappeared,AnnexinVanalysisshoitochondrialtransmembranepotentialdecreased.Itisconcludedthatthematrinecaneffecti

4、velyinhibitetheRPM8226cellgroedependentmanner.ItispresumedthatthematrineinducesRPMI8226cellapoptosisthroughmitochondrialsignalingpathatrine;multiplemyeloma;RPMI8226cell;apoptosis多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞克隆性增生的血液系统恶性肿瘤，多发生于老年人。随着社会人口的老龄化，其发病率呈逐渐增高的趋势。几十年来对MM一直采用激素和细胞毒性药物联合治疗，但其仍是一种不可治愈的血液系统肿瘤。由此可

5、见，研发新的治疗方法具有重要的临床价值［1,2］。苦参是传统的中草药,具有抗肿瘤抗炎的作用，苦参碱是其中主要的生物碱。多年来的药理和临床研究发现苦参有抗病毒、抗炎、镇痛解热作用和强心、降压、抗心律失常、抗肿瘤作用，特别是抗瘤作用的发现引起了人们的普遍关注［3］。我们的研究结果证实，一定浓度的苦参碱能够诱导骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡。材料和方法材料多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞由本实验室保存。苦参碱由中国生物制品、药品检定所提供，用RPMI1640培养液调整浓度为10mg/ml,4℃保存。RPMI1640培养液购自Hyclone公司。AnnexinV凋亡检测

6、试剂盒,Rh123及PI购自晶美生物技术公司。流式细胞分析仪FACSCalibur为Beckman公司产品。细胞培养RPMI8226细胞培养于含10％小牛血清的RPMI1640培养液中，取对数生长期细胞，调整细胞浓度为2×105/ml，加入苦参碱使其终浓度分别为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml，于37℃、5%CO2条件下培养24、48小时。对照组除不加苦参碱外其余相同。细胞活存率由台盼蓝拒染法测定，根据处理组存活细胞数与死细胞数的比例进行计算。生长抑制率及细胞活存率按如下公式计算：对照组细胞数］×100%活存率=［活细胞数/(活细胞数+死细胞数)］×1

7、00%细胞形态学观察收集经药物作用后的细胞，涂片晾干，瑞氏染色液染色，油镜下观察典型凋亡细胞。AnnexinV/PI测定用0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml浓度苦参碱处理骨髓瘤细胞RPMI822624、48小时后轻轻收获细胞1×106个，用冷PBS洗1遍后加入490μl结合缓冲液，轻轻混匀细胞后加入5μlAnnexinV和5μlPI，10分钟后用流式细胞仪检测［4］。DNA琼脂糖凝胶电泳样品经1mg/ml苦参碱作用24、48小时后，对每种样品收集1×106个细胞，酚－氯仿常规提取DNA，取样加入1.5％琼脂糖凝胶电泳1-2