氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究【摘要】　　目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS73骨肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为，，/L的氧化苦参碱对OS73骨肉瘤细胞相对抑制率分别为%，%，%；流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为

2、%，%，%；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；显微镜显示细胞的凋亡形态。结论氧化苦参碱能显著抑制OS73细胞增殖、促进其凋亡。【关键词】骨肉瘤细胞氧化苦参碱凋亡Abstract:ObjectiveTostudythegrowth-inhibitoryeffectandthemechanismonapoptosisinducedbyoxymatrineonOS73osteosarcomacellsweretreatedwithoxymatrinefordays.Thecyto-toxicitywasobservedbyMTTassay.Theapopt

3、oticrateswereshownbyflowcytometry(FCM).ElectronmicroscopyandDNAgelelectrophoresiswereappliedtodemonstrateofthepresenceofapoptosis.ResultsWhenosteosarcomacellsweretreatedwithoxymatrine(,./L),thecytotoxicity课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济

4、具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果indexeswere%,%%respectively,theapoptosticrateswere%，%，%.Theobviousapotosismorphologicalchangesinosteosarcomacellswereshownbyelectronmicroscope.ConclusionOxymatrineisabletoinhibittheproliferationandinducetheapoptosisofOS73cells

5、significantly.Itisapotentialandvaluableproposalforclinicaltreatmentofosteosarcoma.Keywords:Osteosarcoma;Oxymatrine;Apoptosis氧化苦参碱(oxymatrine)是从豆科植物苦参、苦豆子中提取的有效成分，具有广泛的生物活性,其抗病毒、抗炎及对中枢神经系统的镇静、镇痛、解热、降温作用和强心、降压、抗心率失常、调节免疫功能已被广泛用于临床各科［1］。近几年，氧化苦参碱的抑瘤作用已逐步被证实。如氧化苦参碱诱导人乳腺癌细胞的凋亡［2］，对

6、小鼠肉瘤S180的抑制作用［3］。本实验选用不同浓度的氧化苦参碱作用OS732细胞，检测细胞凋亡的各项指标，为氧化苦参碱在抗肿瘤治疗方面提供一定的参考价值。1材料与方法1.1材料氧化苦参碱由宁夏紫荆花药业股份有限公司提供,纯度%，批号XX0402；人骨肉瘤细胞株OS73购自北京积水潭医院课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果骨科研究所。RPMI

7、l640购自美国sigma公司。小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司。MTT试剂，美国Sigma公司产品；流式细胞仪，美国BectonDickinsong公司;普通光镜，日本Olympus公司产品；5%CO孵箱，日本公司产品，型号cpd-1700。超净工作台，苏净集团安泰公司，型号：AIR;胰酶购自Gibco公司。MTT酶联免疫光电吸收仪，购自南京国营华东电子厂，型号DG-022A.1.方法1..1细胞的培养　将OS73细胞置于含10%小牛血清的RPMll640培养液，于37℃，5%CO2湿度100%的培养箱孵育。维持细胞处于对数生长期，备用。1

8、..四氮噻唑蓝(MTT)比色法取指数生长期生长状态较佳的细胞,经%胰酶消化后配制成浓度为1×105cell/ml的细胞悬液