骨肉瘤细胞失巢凋亡的研究与vpa诱导mg63失巢凋亡的研究

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1、中山大学硕士学位论文骨肉瘤失巢凋亡研究及VPA诱导MG63失巢凋亡的研究骨肉瘤细胞失巢凋亡的研究及VPA诱导MG63失巢凋亡的研究专业：外科学硕士生：徐名洪导师：黄纲副主任医师中山大学附属第一医院骨肿瘤科中文摘要第一章骨肉瘤细胞失巢凋亡的研究目的用永生化成骨细胞hFOBl．19为阴性对照，比较MG63、U20S、Saos2三种骨肉瘤细胞抗失巢凋亡生物学特性，探讨骨肉瘤抗失巢凋亡能力及机制。方法利用poly-HEMA处理培养皿，模拟失巢环境，悬浮培养成骨细胞hFOBl．19和三种骨肉瘤细胞系MG63、U

2、20S、Saos2。利用光学显微镜分别对粘附培养和悬浮培养细胞显微结构进行观察；流式细胞仪检测在不同处理、不同时间下各种细胞的凋亡率和细胞周期。Westernblot检测细胞FlipS／L蛋白、Caspase3蛋白表达。按照文酬231方法培养骨肉瘤细胞系U20S抗失巢凋亡子代细胞，研究子代和亲代U20S细胞抗失巢凋亡差异以及Akt表达的不同，初步探讨发生的机制。结果成骨细胞hFOBl．19和骨肉瘤细胞系MG63、Saos2、U20S在悬浮培养下形态与贴壁生长的细胞相比都发生明显变化。镜下，未处理培养皿

3、中hFOBl．19贴壁生长，细胞伸展呈多角型，三种骨肉瘤细胞生长良好，增殖迅速。hFOBl．19悬浮生中山大学硕士学位论文骨肉瘤失巢凋亡研究及VIA诱导MG63失巢凋亡的研究长后，细胞呈小圆形单个细胞，聚集成团的细胞很少见，随着时间变化，细胞无明显增殖且出现凋亡。悬浮生长骨肉瘤细胞变圆，聚集成团，单个骨肉瘤细胞较少见，随着时间推移，部分细胞发生凋亡坏死形态学改变。．PI单染流式细胞仪检测显示，永生化的成骨细胞11FOBl．19在失巢悬浮环境下出现明显凋亡，72h凋亡率为(85．954"2．12)oA，

4、与贴壁生长的对照组相比差别有统计学意义(P

5、．19的Flip蛋白低表达，骨肉瘤细胞U20S和MG63的Flip蛋白高表达，说明骨肉瘤细胞抗失巢凋亡和Flip高表达有关。进一步实验显示，经诱导抗失巢凋亡U20S子代和亲代细胞，悬浮失巢培养72h，凋亡率分别为(34．12±5．50)％和(47．544．7．08)％，(p

6、论1．骨肉瘤细胞相对于正常成骨细胞具有抗失巢凋亡特性。2．骨肉瘤细胞抗失巢凋亡与细胞高表达FHp相关。3．骨肉瘤细胞抗失巢凋亡经诱导可进一步增强。4．子代骨肉瘤细胞的抗失巢凋亡能力增强与Akt高表达有关。关键词：骨肉瘤，失巢凋亡，Flip，AktII中山大学硕士学位论文骨肉瘤失巢凋亡研究及VIA诱导MG63失巢凋亡的研究第二章VPA诱导骨肉瘤细胞MG63失巢凋亡的研究目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(Ⅵ)A)对骨肉瘤细胞系MG63抗失巢凋亡影响，探讨其发生机制。方法不同浓度VPA处理MG63细胞

7、24小时、48小时、72小时，MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期；Hoechst33258观察细胞凋亡核形态；软琼脂克隆形成实验检测VPA对MG63锚着不粘附增殖能力影响；Westernblot检测蛋白Caspase3和蛋白Flip表达。结果VPA处理骨肉瘤细胞系MG63后，肿瘤细胞发生明显增殖抑制，浓度分别为0、0．5、l、2、4、8、16mmol／L的VPA处理MG63细胞48h，各浓度组的细胞增殖抑制率分别为0’(2．88142．32)％，(6．0078士4．3)％，(8

8、．9276：1：1．53)％，(414-4．15)％，(67．10854-0．98)％和(87．07754-1．23)％，和对照组相比，差别有统计学意义(P