资源描述：
《氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究论文【摘要】目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为1.77，3.55，5.32mmoL/L的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%，29.0%，47.0%；流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%，18.6%，27.
2、7%；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；显微镜显示细胞的凋亡形态。结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。【关键词】骨肉瘤细胞氧化苦参碱凋亡Abstract:ObjectiveTostudythegroechanismonapoptosisinducedbyoxymatrineonOS732osteosaracells.MethodsOsteosaracellsatrinefor3days.Thecyto-toxicityetry(FCM).ElectronmicroscopyandDNAg
3、elelectrophoresisonstrateofthepresenceofapoptosis.ResultsIl640购自美国sigma公司。小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司。MTT试剂，美国Sigma公司产品；流式细胞仪，美国BectonDickinsong公司;普通光镜，日本Olympus公司产品；5%CO2孵箱，日本公司产品，型号cpd-1700。超净工作台，苏净集团安泰公司，型号：AIR;胰酶购自Gibco公司。MTT酶联免疫光电吸收仪，购自南京国营华东电子厂，型号DG-3022A.1
4、.2方法1.2.1细胞的培养将OS732细胞置于含10%小牛血清的RPMll640培养液，于37℃，5%CO2湿度100%的培养箱孵育。维持细胞处于对数生长期，备用。1.2.2四氮噻唑蓝(MTT)比色法取指数生长期生长状态较佳的细胞,经0.25%胰酶消化后配制成浓度为1×105cell/ml的细胞悬液,取96孔板,每孔接种1×104个细胞,按氧化苦参碱浓度为1.77，3.55，5.32mmol/L［2，4］作用于细胞,.freelg/ml)30μl，继续孵育4h,终止培养,弃上清液,每孔加入100μl二甲
5、亚砜,振荡10min,选择570nm波长,在自动酶联检测仪上测定各孔光吸收值(A),并计算其生长抑制率。抑制率（%）=阴性对照组A值-试验组A值）阴性对照组A值×100%1.2.3流式细胞仪(FCM)分析收集氧化苦参碱浓度为1.77，3.55，5.32mmol/L作用后的1×106个OS732骨肉瘤细胞,经0.25%胰酶消化后,取细胞培养液200μl,1000r/min离心5min，弃上清液,PBS洗涤2次，1000r/min离心5min，弃上清液,加冷的70%乙醇4℃固定24h，离心弃乙醇，PBS洗1次
6、,1000r/min离心5min，弃上清液，滴加0.5ml100μg/mlRNase，放置4h，离心弃上清液，PBS洗1次，300目筛网过滤1次,1000r/min离心5min，弃上清液,加0.5ml碘化丙啶（PI）过夜。上流式细胞仪测定。分析亚二倍体峰,分析细胞凋亡比例［5］。1.2.4细胞DNA提取和电泳观察胰酶消化后，收集药物作用组及对照组培养细胞(5×106个),常规方法提取细胞DNA,1.5%琼脂糖凝胶电泳,在室温,电压5V,恒流60mA,电泳2h。紫外灯下观察。1.2.5光学显微镜下形态学观察
7、收集各组细胞,PBS液洗涤2遍,做离心涂片，用甲醇固定3～5min，滴加in，入in，用蒸馏水冲洗，在显微镜下观察细胞形态。1.2.6统计学分析实验数据用±s表示,用SPSS10.0统计软件,采用方差分析方法进行处理。2结果2.1对吸光度及细胞生长的影响OS732细胞单独与浓度分别1.77，3.55，5.32mmol/L的氧化苦参碱作用后,吸光度(A)值,细胞生长抑制率值见表1，氧化苦参碱各药物浓度组分别和相应的对照组比较，均有显著性差异（P0.05），其对OS732细胞的生长有显著的抑制作用，且抑制作用
8、与药物浓度之间有明显的量效关系。见图1。表1氧化苦参碱作用OS732骨肉瘤细胞后的A值及相对抑制率(略)2.2氧化苦参碱对OS732细胞的凋亡诱导作用氧化苦参碱浓度为1.77，3.55，5.32mmoL/L时,凋亡率分别为11.8%，18.6%，27.7%。2.3琼脂糖凝胶电泳用苦参碱处理OS732细胞3d，DNA凝胶电泳可出现梯状DNA,大小为180bp及其整倍数。见图2。2.4光学显微镜下观察细胞形态学变化各种浓度的氧化苦
