尿多酸肽（cda2）诱导多发性骨髓瘤细胞rpmi8226凋亡的实验研究

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1、尿多酸肽（CDA2）诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究作者：叶宝东沈一平周郁鸿邵科钉俞庆宏【摘要】　　［目的］观察尿多酸肽（CDA2）对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226抑制增殖和凋亡作用。［方法］应用MTT法，检测CDA2对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响。通过Hochest33258染色、流式细胞仪（AnnexinV和PI双染色）检测细胞凋亡。［结果］CDA2明显抑制RPM18226细胞的增殖。CDA2作用RPM18226细胞增殖24h的半数抑制浓度（IC

2、50）分别为1.64mg/g。采用Hochest33258染色，荧光显微镜下观察CDA2以2mg/g及4mg/g终浓度作用于RPM1822624h后细胞形态改变，可见明显的凋亡小体出现。AnnexinVPI双标记法流式细胞仪分析结果显示，RPMI8226细胞2mg/gCDA2作用6、12、24h后，早期凋亡细胞百分数分别为5.43%、12.02%、29.07%，明显高于空白对照组4.88%。［结论］CDA2对MM细胞株RPMI8226有生长抑制作用，可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。【关

3、键词】多发性骨髓瘤；尿多酸肽；细胞凋亡　　Abstract：［Objective］Toinvestigatetheproliferationinhibitionandapoptosisinducingeffectofuroacitides（CDA2）onhumanmultiplemyelomaRPMI8226cells.［Methods］MTT9assaywasundertakentoobservethegrowthinhibitionofRPMI8226cellsexposedtoCDA

4、2.TheapoptosisofRPMI8226cellsweredetectedbyfluorescencestainingwithhochest33258，flowcytometry（AnnexinVandPIstaining）.［Results］MTTanalysisindicatedthattheproliferationofRPMI8226cellswereinhibitedsignificantlywithCDA2treatmentfor24h.Treatmentwithdiffe

5、rentconcentrationsofCDA2for24h，50%growthinhibition（IC50）at24hinRPMI8226was1.64mg/g.Cellappearanceswereobservedbyfluorescencestainingwithhochest33258afterCDA2（2mg/gand4mg/g）forRPMI8226，wecouldseeapoptoticbodyevidentlywithfluorescencemicroscope.After

6、treatmentwithconcentrationsofCDA2（2mg/g）for6h，12h，24h，RPMI8226had5.43%，12.02%and29.07%apoptoticcells，whichwasmorethanthatofuntreatedgroup（4.88%）.［Conclusions］Uroacitides（CDA2）couldinhibittheproliferationandinduceapoptosisofhumanmultiplemyelomaRPMI8

7、226cellsinvitro.　　Keywords：multiplemyeloma；CDA2；cellapoptosis尿多酸肽（CDA92）是从健康人尿中提取的含有多种有机酸和多肽成分的非细胞毒性新型诱导分化治疗抗癌药［1］。近年来的研究表明，CDA2对多种肿瘤细胞具有诱导分化和凋亡作用，而且还可以逆转肿瘤耐药，防止肿瘤复发和转移［2］。但对多发性骨髓瘤（MultipleMyeloma，MM）的作用尚未见报道，我们观察了CDA2对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的作用，并初步

8、从诱导凋亡角度探讨其作用机制，为临床应用CDA2治疗提供多发性骨髓瘤实验依据。　　1材料和方法　　1.1细胞株　　人多发性骨髓瘤细胞株：RPM18226（浙江大学第一附属医院血液研究所惠赠）。　　1.2主要试剂及药品　　CDA2由台湾信东化学工业公司廖明徵博士馈赠（原药，药物浓度为278mg/ml），实验前用RPMI1640培养液稀释成所需浓度。RPMI1640，胎牛血清（FBS）：GIBCO公司；四甲基偶氮哇蓝（3（4，5dimethylthiazol2yl）2，5diphem