米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用

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1、米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用【关键词】米帕【摘要】目的研究米帕明(Imi)对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用。方法分离培养15～１８　ｄ胎龄的大鼠神经细胞，加入谷氨酸(Glu)，观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及米帕明的保护作用。结果加入谷氨酸后，神经细胞出现明显损伤性变化，死亡率升高，培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量增加，细胞匀浆中丙二醛(MDA)生成增加，超氧化物歧化酶(SOD)含量明显减少。Imi能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论Iｍｉ对谷氨酸所致

2、的神经细胞损伤具有保护作用，其作用机制可能与钙拮抗作用有关。【关键词】米帕明；谷氨酸；大脑皮层神经细胞；细胞培养【Ａbstract】ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofimipramine(Imi)onglutamate-inducedneurotoxicityinculturedratcerebralcorticalneurons.ＭethodsCorticalneuronsoffetalofrationglutamate-inducedneurotox

3、icityediumdevelopedaneurotoxicityexpressedintheincreaseofLDHleakageandNO,MDAcontentandthedecreaseofactivityofSOD,asentofmorphologicalinjury.Imiprotectedneuronsagainstabovedamagesignificantly.ＣonclusionTheresultssuggestthatImipreventsthetoxicityofGlu.

4、Anditmaybeattributetoitseffectofanticalcium.【Ｋeyipramine,glutamate,cerebralcorticalneurons,cellculture缺血性脑血管病是临床常见疾病，对其发病机制人们提出了多种学说，如钙超载学说、兴奋毒性学说、自由基学说等，其中兴奋毒性学说早已为人们所重视。谷氨酸(glutamate,Glu)是中枢神经系统内含量最高的兴奋性氨基酸，而几乎所有的神经细胞都有谷氨酸受体，因此任何引起胞外谷氨酸浓度异常增高的病理变化均

5、会产生兴奋毒性。有研究发现［１］，米帕明(ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ，Ｉｍｉ）具有钙拮抗作用，对兔基底动脉有选择性舒张作用，因此考虑该药可能有脑保护作用。本研究利用培养大鼠皮层神经细胞，建立谷氨酸损伤模型，观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及研究Iｍｉ是否具有保护作用，并探讨其可能的作用机制。１材料与方法１．１材料TT)均为Sigma公司产品；DMEM高糖培养基、胎牛血清、马血清均为Gibco公司产品；盐酸阿糖胞苷为上海华联制药有限公司产品，批号990901；乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、超氧化

6、物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒均为南京建成生物工程研究产品；总蛋白试剂盒为北京中生生物工程高技术公司产品。其余试剂均为市售分析纯。HERAcell二氧化碳培养箱(德国GmbH公司)；SEM培养基中，剔除软脑膜和血管，将脑组织移入含血清的DMEM培养基(含10%胎牛血清和10%马血清)的小烧杯中，用细口吸管反复轻轻吹打成细胞悬液，以200目不锈钢筛网过滤，并将滤液细胞数调至1×１０６个・ｍｌ－１，接种于经0.01%多聚Ｌ-赖氨酸过夜处理的细胞培养板中(24孔板接种1ｍｌ&

7、#12539;孔－１，96孔板接种0.1　ｍｌ・孔－１)，置37℃、５％CO２培养箱中培养。次日待细胞贴壁后换液1次并去除死细胞，以后每3～４d换液1次。细胞培养至第6天时，加入终浓度10　μ　ｍｏｌ・Ｌ－１阿糖胞苷以抑制非神经细胞的生长，18　ｈ后换新的DMEM培养基继续培养。１．２．２Glu对神经细胞的损伤［３，４］：取培养12～１４　ｄ的神经细胞，吸去原培养液，用无Ｍｇ２＋Ｅarlie液［(ｍｍｏｌ・Ｌ-１）：ＮaCl143，ＫＣl５.４，ＣａＣｌ

8、２１.８，ＮａＨ２ＰＯ４１.０，葡萄糖5.6，ＨＥＰＥＳ　２.４，ｐＨ　７.４］洗2遍，每孔加入含Glu终浓度5×１０－４ｍｏｌ・Ｌ－１的无Mｇ２＋Ｅarlie液1　ｍｌ(24孔板)、０.１　ｍｌ（９６孔板)，15　ｍｉｎ后用DMEM培养基洗去Glu,再换用无血清的DMEM培养基，置37℃、５％ＣＯ２培养箱中继续培养24　ｈ。正常对照组不加Gｌｕ，其余处理同上。给药组在损伤处理前24　ｈ及处理过程中均加入不同浓度的Iｍｉ。１．２．３MTT微量自动比色［５］：Ｇlu损伤细胞后24　ｈ