丹参对酒精和tat蛋白损伤神经细胞的保护作用研究

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1、ProtectiveEffectsofSalviaMiltiorrhizainNerveCellsbyAlcholorTatDamageADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineBySupervisor：Pro．LiuBinLiuHongliangJUNE，2014关于学位论文独创声明和学术诚信承诺Y2543955IIIllllUllltlllllllmlllllII

2、l本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位中请人(学位论文作者)签名：201￡f年岁月／留日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解

3、并同意河南大学有关保留、使用学位论文盼要求，即河南大学有权向国家厨书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)J．·，．学位获得者(学位论文作者)签名：姜堑主!b201印年f月J8日学位论文指导教师签名：201埠年S窍摘要目的：应用酒精和Tat蛋白制作PCI2细胞和鼠脑片神经细胞损伤模型，观察丹参配方颗粒和丹参有效成分对酒精及T

4、at蛋白损伤神经细胞的保护作用，探讨酒精、Tat蛋白对神经细胞损伤及丹参保护的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率；酶标法检测PCI2细胞培养液中LDH活性：Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态的变化；应用原位末端转移酶标记法(TUNEL)和AnnexinV／PI标记染色流式细胞仪检测PCI2细胞凋亡情况；相关试剂盒测定超氧化物歧化酶(T_SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH．PX)的活性和丙二醛(MDA)的量；DCFH—DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平；Western．blotting法检测细胞凋亡信号通路中相关蛋白表达量的改变；T

5、UNEL法检测脑片神经细胞凋亡；免疫组织化学法检测细胞突触前体蛋白突触素数量的变化；DiI金颗粒散射标记对树突棘进行定量分析。结果：酒精对PCI2细胞生长具有抑制作用，且呈浓度依赖性(P0．05)，但用丹参溶液作用于800mmol／L浓度酒精损伤的PCI2细胞时，0．2rtg／ml的丹参溶液能够显著减少细胞损伤，这种保护作用在一定浓度范围内(0．2—1．099／m1)随丹参浓度的增加而增强(尸<0．05)，说明丹参对酒精所致PCI2细胞的损伤具有保护作用。酒精损伤造成PCI2细胞形态发生变化，出现染色

6、质凝聚，核固缩，DNA片段化，而后出现凋亡小体；TUNEL和AnnexinV／PI标记染色流式细胞仪检测显示800mmol／L酒精处24h后细胞凋亡率与对照组相比明显高(P<0．01)；细胞氧化一抗氧化相关物质或酶发生变化，ROS、MDA含量明显升高，抗氧化酶T-SOD、CAT和GSH．PX活性明显降低(P<0．01)。WesternBlotting检测结果显示800mmol／L酒精处理后细胞BAX蛋白相对表达量增加、Caspase．3出现活性片段蛋白相对表达量增加、BCL·2蛋白相对表达量下降(P<0．01)。同时加入1pg／ml丹参配方颗粒后与T酒精处理组相比，细胞M

7、DA含量和ROS水平降低，细胞抗氧化酶T-SOD、CAT和GSH．PX酶的活性升高(P<0．01)；且细胞BAX蛋白相对表达量减少、Caspase．3两活性片段蛋白相对表达量减少、BCL．2蛋白相对表达量增加(尸