亚低温联合药物后处理对谷氨酸诱导原代鼠皮质神经细胞损伤的保护作用.pdf

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1、目录摘要……………………………………1前言……………………………………2材料与方法………………………………4结果……………………………………9讨论……………………………………20参考文献…………………………………24英文摘要…………………………………29致谢…………………………………31略缩词表………………………………32论文原创性声明………………………33附：综述……………………………34贵阳医学院2011届硕士研究生论文亚低温联合药物后处理对谷氨酸诱导原代鼠皮质神经细胞损伤的保护作用专业：麻醉学研究生：刘文悦，导师：王迪芬教授摘要目的：1探讨亚低温联合药物后处理对大脑皮质神经细胞缺

2、血再灌注损伤的保护作用。2比较亚低温联合依达拉奉与亚低温联合丙泊酚后处理的保护作用。方法：取出生24小时以内的新生SD乳鼠的脑皮质细胞,体外培养至第七天随机分为五组（每组取30例样本）：A组（正常细胞对照组），B组（损伤细胞对照组），C组（亚低温处理损伤细胞组），D组（亚低温联合依达拉奉处理损伤细胞组），E组（亚低温联合丙泊酚处理损伤细胞组）。B、C、D、E组第七天予以200μmol/L谷氨酸（GLU）损伤30min，所有组换正常培养液继续培养，C、D、E组再0.5h后放入33℃、5%的二氧化碳温箱中，同时D、E组予以对应药物后处理，孵育24小时后，所有组更换正常培养基继续培养24h。

3、细胞生长至第九天用ELISA法观察c-fos蛋白含量、测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、用MTT法测定神经细胞存活率、用流式细胞仪检测细胞凋亡率、在HE染色下用倒置相差显微镜观察神经组细胞的形态学变化和透视电镜下细胞器的改变。结果：与损伤组比，亚低温后处理组、亚低温联合依达拉奉后处理组、亚低温联合丙泊酚后处理组细胞存活率明显升高[(0.43±0.04)%、(0.82±0.05)%、(0.70±0.05)%比(0.20±0.02)%]，细胞凋亡率[(2.31±0.40)%、(1.38±0.24)%、(1.90±0.32)%比(9.83±0.45)]、c-fos蛋白浓度[(3.94±0.45

4、)%、(2.95±0.34)、(4.01±0.34)%比(6.96±0.42)%]、LDH漏出率[(0.58±0.03)%、(0.53±0.02)%、(0.57±0.02)%比(0.67±0.03)%]均不同程度的降低（P<0.05或P<0.01）；细胞形态受损程度和神经元超微结构病变均减轻。三个后处理组中，以D组后处理组效果最佳，C组与E组在c-fos蛋白浓度、LDH漏出率两组指标中差异无统计学意义。结论：亚低温、亚低温联合依达拉奉、亚低温联合丙泊酚后处理对谷氨酸诱导的脑缺血再灌注后的脑皮质神经细胞均有保护作用，三者之间以亚低温联合依达拉奉的效果更显著。1贵阳医学院2011届硕士研究

5、生论文[关键词]脑皮质神经细胞谷氨酸损伤模型亚低温依达拉奉丙泊酚后处理2贵阳医学院2011届硕士研究生论文前言缺血缺氧性脑病(HIE)是由各种病因引起的脑部血流中断后再灌注疾病的总称，以其高发病率、高死亡率、高致残率和高复发率的四高特点成为当今严重威[1,2]胁人类健康的三大疾病之一。因此对脑保护的研究一直是个热点。近年来的研究发现缺氧缺血性脑病脑细胞的损伤可分为由急性能量衰竭造[3]成细胞坏死及迟发性神经元损伤两个阶段,进一步研究表明后者即为神经凋亡,脑缺血再灌注损伤的机制主要有和氧自由基、神经细胞内钙超载、兴奋性氨基酸[4]增多、NO等相关。缺血后处理是在缺血后再灌注即刻给予干预措

6、施从而产生缺血耐受，具有良[5]好的临床可控性。药物后处理通过药物激发或模拟机体自身内源性保护物质而呈现保护作用。以药物替代缺血刺激，克服了缺血损伤的弊端，在临床上更具有[6]实用价值。亚低温脑保护的研究已有数十年的历史了，它对脑缺血再灌注损伤确有保护[7]作用。在脑外伤、脑出血、脑缺血等多种脑部疾病中亚低温能够通过多种途径[8，9]发挥脑保护作用，亚低温明显抑制脑缺氧后各种内源性有害因子的生存、释[10]放，甚至有文献报道指出，脑保护和脑复苏时，采用治疗性轻度低温疗法是唯一得到证实并推荐的有效措施。丙泊酚是一种高脂溶性、低水溶性的静脉全麻药物，其对缺血性脑损伤有一[11]定的保护作用

7、，其直接作用机制可能为钙拮抗作用、氧自由基清除作用、抑制兴奋性氨基酸释放和神经元代谢作用。依达拉奉是一种强效的小分子羟自由基清除剂及抗氧化剂，其血脑屏障穿透率约为60％，给药后可以清除脑内的具有高度细胞毒性的羟自由基从而产生脑[12]保护作用。大量实验室数据和临床实验证明，亚低温、依达拉奉、丙泊酚在不同途径和位点上可起到脑保护作用，且后两种药物经统计学验证脑保护作用无明显差异。但国内外对亚低温联合药物治疗的研究甚少，本实验旨在研究亚低温联合药物