丹参酮ⅱa对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用论文

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1、丹参酮ⅡA对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用论文张萌涛钱亦华杨杰史利利朱淑娟刘朝晖【摘要】目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对谷氨酸(Glu)联合β淀粉样蛋白2535(Aβ2535)诱导PC12细胞、Meynert核(nbM)神经元损伤的保护作用。方法培养PC12细胞，用MTT法观察TanⅡA三个不同浓度(2.5、5.0、10μmol/L)对Glu联合Aβ2535损伤PC12细胞的保护作用;运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术，检测急性分离nbM神经元在Glu联合Aβ诱导损伤时细胞内钙离子浓度(〔Ca2+〕i)变化，及不同浓度TanⅡA对这种〔Ca2+〕i变化的影响。结果M

2、TT检测结果表明，TanⅡA各组细胞活力、损伤程度与单纯Aβ+Glu损伤组相比有显著差异(P0.05)，但无剂量依赖关系。Glu联合Aβ2535损伤组〔Ca2+〕i比对照组显著升高(P0.01);TanⅡA各组〔Ca2+〕i均较单独Glu联合Aβ2535处理组有显著降低(P0.01)。结论TanⅡA通过提高细胞活力、维持细胞内钙离子浓度稳态以对抗Glu联合Aβ2535损伤作用。【关键词】阿尔茨海默病;β淀粉样蛋白;谷氨酸;Meynert基底核;PC12细胞【Abstract】ObjectiveToexploretheprotectionofTanshinoneⅡA(TanⅡA)ond

3、amageofPC12cellsandnucleusbasalisofmeynert(nbM)neuronsinducedbyglutamate(Glu)andβamyloidprotein25～35(Aβ25～35).MethodsMTTassayol/L)oncellulardamageinducedbyGluandAβ2535.Laserscanningconfocalmicroscopy(LSCM)techniqueconcentration(〔Ca2+〕i).ResultsThereagebetanner.Thelevelof〔Ca2+〕iinGlu+Aβ25～35groupa

4、geinducedbyGluandAβ2535throughincreasingcellsurvivalandsustainingthehomeostasisof〔Ca2+〕i.【Keyer′sdisease(AD);βamyloidprotein(Aβ);Glutamate(Glu);NucleusbasalisofMeynert(nbM);PC12cells目前西医治疗阿尔茨海默病(AD)主要是停留在缓解症状上。相比之下，祖国医学在延缓衰老以及老年性疾病的防治方面有着丰富的理论和实践经验，具有潜在的优势和广阔的开发前景。中药丹参〔1〕属于活血化瘀类中药.freela公司);DMEM培

5、养基(Gibco公司);新生牛血清(杭州四季青生物工程公司);Glu、Aβ2535、Fluo3/AM、HEPES、钙离子载体Ionomycin均购于美国Sigma公司;EGTA(Amresco)。PC12细胞为张葳蕤惠赠。实验动物：正常SD大鼠(10～15d)，体重约20～30g，雌雄不拘，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。1.2方法1.2.1PC12细胞的培养及大鼠nbM神经元的急性分离PC12细胞用含有15%新生牛血清的DMEM培养基培养，置37℃、5%CO2培养箱内，隔2d换液一次，当细胞生长达70%～80%融合时传代、继续培养。取对数生长期的细胞用于实验。急性分离nbM神经元

6、的方法参照文献〔3，4〕：根据包新民等〔5〕所编的大鼠脑立体定位图谱来定位nbM。大鼠在10%水合氯醛腹腔麻醉下，快速断头取脑，移入冰的标准细胞外液(通O2)中冰浴约1min，快速修剪后黏到标本台上放入切片机槽内切活脑片，片厚400μm，将切片移入标准细胞外液中(通O2)，孵育平衡50min;31℃条件下，用0.016%pronaseE消化20～30min;再移入标准细胞外液中平衡1.5～2h，用特制的针扎取nbM，放入充氧的标准细胞外液中，使用不同内径并经过热抛光的Pasteur玻璃管吹散组织块，使之成为单细胞悬液。移细胞悬液至多聚赖氨酸预处理的Petri培养皿中，20min后待神经元完全

7、贴附于培养皿上，用标准细胞外液轻轻冲洗培养皿2～3次，洗掉未贴壁的细胞及组织碎片，继续下一步实验。整个实验过程在20℃～26℃条件下进行。1.2.2主要溶液及其配制Aβ的“老化处理”：将Aβ2535溶解于消毒的三蒸水，37℃孵育72h，使其变成聚集状的Aβ，储备浓度10μmol/L，4℃保存，用时用DMEM培养液稀释成工作浓度;TanⅡA配制：用二甲基亚砜(DMSO)避光震荡溶解TanⅡA干粉，配成1mmo