丹参酮ⅱa对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用

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1、丹参酮ⅡA对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用作者：张萌涛钱亦华杨杰史利利朱淑娟刘朝晖【摘要】目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对谷氨酸(Glu)联合β淀粉样蛋白2535(Aβ2535)诱导PC12细胞、Meynert核(nbM)神经元损伤的保护作用。方法培养PC12细胞，用MTT法观察TanⅡA三个不同浓度(2.5、5.0、10μmol/L)对Glu联合Aβ2535损伤PC12细胞的保护作用;运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术，检测急性分离nbM神经元在Glu联合Aβ诱导损伤时细胞内钙离子浓度(〔Ca2+〕i)变

2、化，及不同浓度TanⅡA对这种〔Ca2+〕i变化的影响。结果MTT检测结果表明，TanⅡA各组细胞活力、损伤程度与单纯Aβ+Glu损伤组相比有显著差异(P<0.05)，但无剂量依赖关系。Glu联合Aβ2535损伤组〔Ca2+〕i比对照组显著升高(P<0.01);TanⅡA各组〔Ca2+〕i均较单独Glu联合Aβ2535处理组有显著降低(P<0.01)。结论TanⅡA通过提高细胞活力、维持细胞内钙离子浓度稳态以对抗Glu联合Aβ2535损伤作用。【关键词】阿尔茨海默病;β淀粉样蛋白;谷氨酸;Meynert基底

3、核;PC12细胞　　【Abstract】ObjectiveToexploretheprotectionofTanshinoneⅡA(TanⅡA)ondamageofPC12cellsandnucleusbasalisofmeynert(nbM)neuronsinducedbyglutamate(Glu)andβamyloidprotEin25～35(Aβ25～35).MethodsMTTassayol/L)oncellulardamageinducedbyGluandAβ2535.Laserscanningconfocalmic

4、roscopy(LSCM)techniqueconcentration(〔Ca2+〕i).ResultsThereagebetanner.Thelevelof〔Ca2+〕iinGlu+Aβ25～35groupageinducedbyGluandAβ2535throughincreasingcellsurvivalandsustainingthehomeostasisof〔Ca2+〕i.　　【Keyer′sdisease(AD);βamyloidprotein(Aβ);Glutamate(Glu);Nucleusbasalisof

5、Meynert(nbM);PC12cells　　目前西医治疗阿尔茨海默病(AD)主要是停留在缓解症状上。相比之下，祖国医学在延缓衰老以及老年性疾病的防治方面有着丰富的理论和实践经验，具有潜在的优势和广阔的开发前景。中药丹参〔1〕属于活血化瘀类中药，同时具有养血安神功效。丹参酮ⅡA(TanⅡA)为丹参有效成分之一，为脂溶性、樱红色、针状结晶。TanⅡA分子式C19H18O3，分子量294.33，含有醌型结构，易被氧化还原，可参与机体的多种生化反应而有多种生物活性，如降低血液黏滞度、扩张冠状动脉、抗血小板聚集、清除氧自由基、抗脂质氧化、

6、抗肿瘤、抗菌、消炎、雌激素样作用、保护神经元细胞及改善心脑缺血等广泛的药理作用。在心肌缺血/灌注损伤防治中，TanⅡA具有类异搏停样L型钙通道阻断剂作用〔2〕。本研究将探索TanⅡA对谷氨酸(Glu)联合β淀粉样蛋白2535(Aβ2535)诱导PC12细胞、Meynert核(nbM)神经元损伤的保护作用，以便为寻找有效防治AD中药提供实验数据。　　1材料与方法　　1.1材料TanⅡA(西安鸿生生物技术有限公司);噻唑蓝(MTT)(Sigma公司);DMEM培养基(Gibco公司);新生牛血清(杭州四季青生物工程公司);Glu、

7、Aβ2535、Fluo3/AM、HEPES、钙离子载体Ionomycin均购于美国Sigma公司;EGTA(Amresco)。PC12细胞为张葳蕤惠赠。实验动物：正常SD大鼠(10～15d)，体重约20～30g，雌雄不拘，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。　　1.2方法　　1.2.1PC12细胞的培养及大鼠nbM神经元的急性分离PC12细胞用含有15%新生牛血清的DMEM培养基培养，置37℃、5%CO2培养箱内，隔2d换液一次，当细胞生长达70%～80%融合时传代、继续培养。取对数生长期的细胞用于实验。急性分离nbM神经元的

8、方法参照　　1.3.3大鼠nbM神经元〔Ca2+〕i测定实验分为空白对照组和Aβ+Glu损伤组，Aβ+Glu损伤组又分为单纯Aβ+Glu损伤组、TanⅡA组，其中TanⅡA组再分为2.5、5.0、10μmol/L三个浓度亚组。nbM神