fucoidan对β淀粉样蛋白和dgal联合诱导pc12细胞和小鼠学习记忆能力损伤的保护作

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1、IUllUUllIIIIIIIIIIl独创性声明Y3090922本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：壹弛签字日期：2dL年』^月丝日万方数据关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和

2、电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密0，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。储躲私怛云日期勿多161年f月％日导师签名：告p向。{7151日期：谢占年r月％日万方数据目录一、摘要1(一)中文摘要1(二)英文摘要4二、正文：．．8(一)前言8(二)材料与方法．．10(三)结果一26(四)讨论．．39(五)结论．．43(六)参考文献一44三、综述．49(一)阿尔茨海默症治疗的研究进展．

3、．49(二)参考文献．．56四、附录．62五、致谢。64万方数据大连医科大学硕士学位论文Fucoidan对p淀粉样蛋白和D—gal联合诱导PCI2细胞和小鼠学习记忆能力损伤的保护作用硕士研究生：魏恒云才旨导教师：刍F向阳捌受专业名称：生物化学与分子生物学摘要目的：阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种进行性神经退行性疾病，临床表现为记忆和其他认知功能的丧失。现代医学研究表明，AD发病主要与8一淀粉样肽25"----35(A1325"---35)在脑组织异常沉积、脑内神经血管单元功能异常导致A1325"---35清除障碍、胆碱能神经元受损

4、、氧化应激、神经炎症反应或基因突变等因素有关。Fucoidan是富含岩藻糖和硫酸酯基的水溶性杂聚糖，目前发现仅存在于褐藻‘和某些棘皮动物，如海参、海胆体内，而褐藻来源的Fucoidan具有独特的分支结构，并且不同种属具有不同比例的半乳糖、木糖、甘露糖和糖醛酸等。Fucoidan具有抗衰老、抗凝血、抗血栓、免疫调节、抗肿瘤等活性，是重要的海洋药源物质。本实验研究Fucoidan对A1325"--'35和D—gal联合应用致PC．12细胞损伤的保护作用，检测与衰老相关的生化指标和与细胞凋亡相关的蛋白的变化；采用D．gal用药诱导建立衰老小鼠模型，研究Fucoidan

5、对衰老小鼠学习记忆的改善作用和机制。方法：1．采用乙醇分级沉淀法从粗品Fucoidan中纯化获得Fucoidan。2．采用苯酚．硫酸法、硫酸．咔唑法、自动指示旋光仪、核磁共振仪分别测定Fucoidan的总糖含量、糖醛酸含量、旋光度和官能团。万方数据大连医科大学硕士学位论文3．凝聚态Ap25～35和D．gal的制备，采用酶学检测、Westemblot、流式细胞术得到最佳药物浓度为25／aM＆10mM。4．MTT检测Fucoidan细胞毒性作用。5．光学显微镜和Hoechst33258染色观察观察细胞的外部形态和凋亡细胞核形太J【：小O6．流式细胞术检测Fucoid

6、an对细胞的影响。7．采用Westernblot方法检测细胞中caspase3、caspase3／17p、caspase8、caspa7e9、CytC和Livin、XIAP在蛋白水平以及酶学方法检测细胞中SOD活力和GSH的含量。8．建立D—gal衰老模型，动物行为学实验，酶学检测组织中SOD和AChE的活力，GSH和ChAT含量，尼氏染色检测尼氏小体数量。结果：1．Fucoidan的得率为38．91％。2．Fucoidan总糖含量、硫酸基团含量、糖醛酸含量、分子量和旋光度分别为44．7％、18．5％、12．5％、26．61×104Da和O．990(20003．

7、随着药物浓度的升高，细胞的存活率下降，与Control组相比，AB＆D—gal(1S．uM&lOmM、209M&10mM、259M&10mM、309M&10mM)在处理36h、48h、72h后细胞的存活率下降。酶学检测、Westernblot、流式细胞术得到药物浓度为10mM&259M，处理时间为48h诱导效果最佳。4．Fucoidan处理细胞24h后，各组细胞和用药组细胞相比，细胞的存活率没有显著性差异，说明Fucoidan没有明显的细胞毒性作用。5．Fucoidan保护细胞24h后，Fucoidan各组与对照组相比，细胞神经丝的长度有所恢复，细胞密度增大。P

8、CI2细胞逐步呈现弥漫均