大黄酚对β淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用

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1、大黄酚对β淀粉样蛋白25～35致小鼠学习记忆障碍的改善作用作者：武海霞张丹参张力安芳薛贵平王树【摘要】目的研究大黄酚对凝聚态β淀粉样蛋白25～35(Aβ25～35)致小鼠学习记忆障碍的改善作用,探讨其可能的作用机制。方法采用一次性小鼠右侧脑室注射Aβ25～353μl造成学习记忆障碍动物模型，应用避暗实验、Morris水迷宫实验观察大黄酚(0.1，1.0,10.0mg/kg)腹腔内注射对Aβ25～35模型鼠记忆障碍的改善作用，并于侧脑室注射后17d测定各组小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱生型一氧化氮合酶

2、(iNOS)的活性。结果单侧侧脑室一次注射Aβ25～353μl可引起小鼠学习记忆障碍，同时使脑组织NO含量增加和NOS、iNOS活性升高(P<0.01);而大黄酚(0.1，1.0，10.0mg/kg,ip，17d)可不同程度改善Aβ25～35造成的学习记忆障碍，并降低脑组织NO含量及NOS、iNOS活性(P<0.01)。结论侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠学习记忆障碍，而大黄酚可能通过抑制iNOS/NO参与的在体条件下对Aβ25～35神经毒性的介导，改善Aβ25～35致小鼠学习记忆障碍。【关键词】大黄酚;β淀粉样蛋白

3、;学习记忆;阿尔茨海默病;一氧化氮;一氧化氮合酶13近年，越来越多的研究发现β淀粉样蛋白(Aβ)在脑内沉积形成老年斑(SP)是阿尔茨海默病(AD)的发病基础〔1〕。以往实验表明大黄酚可抑制大鼠肝、脑过氧化脂质的生成〔2，3〕，对急性衰老小鼠记忆障碍有保护作用〔4〕，但其能否改善Aβ25～35所致的学习记忆障碍，尚未见报道。本研究通过Aβ25～35致小鼠记忆障碍并观察大黄酚的改善作用并探讨可能的作用机制。　　1材料与方法　　1.1动物昆明种小鼠,雄性，体重(20±2)g，鼠龄6w，中国科学院药物研究所动物实验中心提供，(动物批号：S

4、CXK京20040001)。分笼饲养，自由吃食和饮水，室温(20±2)℃。　　1.2药品和试剂大黄酚(纯度>98%)，辽宁生物制药研究所提供，用N，N二甲基甲酰胺溶解，吐温80助溶，生理盐水(NS)稀释成所需浓度;Aβ25～35，购自美国Sigma公司，将1mgAβ25～35溶于1ml无菌生理盐水中，密封后置于37℃培养箱中孵育1w，使其变为凝聚状态的Aβ25～35〔5〕，-20℃保存。　　1.3主要仪器设备Morris水迷宫装置，中国医学科学院药物研究所;SBA2程控避暗箱，中国医学科学院药物研究所;721分光光度计

5、，上海精密科学仪器有限公司;FSH132内切式组织匀浆机，江苏环保仪器厂;802B离心机，上海安亭科学仪器厂;S648型恒温水浴箱，上海医疗器械七厂。　　1.4动物分组和给药小鼠100只，随机分成5组：对照组，Aβ25～35模型组，大黄酚0.1、1.0、10.0mg/kg组，每组20天。第1天，对照组侧脑室注射(icv)NS3μl，其他各组icvAβ25～353μl〔6〕。icv后立即ip大黄酚0.1、1.0、10.0mg/kg，对照组、Aβ25～35模型组ip溶剂10ml/kg;2～17d，各小鼠每天ip一次;8～17d，各小

6、鼠每天ip后60min开始各项实验。　　1.5学习记忆行为学实验　　1.5.1避暗实验icv后8d，将小鼠背向洞口放入明室，同时启动程控避暗箱自动记录装置，记录180s内小鼠进入暗室的潜伏期和错误次数，以各组小鼠进入暗室的只数与各组小鼠总只数的比值作为各组错误百分率。24h后以同样方法记录180s内小鼠错误次数、潜伏期和错误百分率，测验记忆成绩。　　1.5.2Morris水迷宫实验Morris水迷宫实验装置由一个不锈钢的圆柱形水池和一个可移动的圆柱形透明有机玻璃站台组成。水池直径120cm，高50cm，站台直径12cm，高24cm，

7、水深25cm，水温控制在(23±0.5)℃13。水池均等分为4个象限，站台置于第一象限。水池上方的摄像机全程跟踪小鼠的活动，计算机记录小鼠找到站台潜伏期、游泳路径长度和搜索策略。①隐藏平台获得实验〔7〕icv后11～15d，每只小鼠连续训练5d，每天4次，每次采用不同的入水点训练120s。训练时将小鼠面朝池壁轻轻放入水中，同时启动记录装置，小鼠找到站台后，让其停留20s;若小鼠120s内未找到站台，则将其放于站台上站立20s，取下休息120s后进行下一次训练。记录120s内小鼠寻找站台的潜伏期、游泳路径长度及所采取的搜索策略。②空间

8、搜索实验〔8〕icv后16d，将可移动的站台从水池中取出，水深不变。以不同的入水点训练4次。结果以小鼠120s穿越站台所处位置的次数表示。　　1.6小鼠脑组织NO，NOS和iNOS含量的测定icv后17d，将小鼠快速断头取脑，制成10