大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用

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1、大黄酚对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用作者：王树张丹参张力安芳薛贵平武海霞【摘要】目的研究大黄酚对脑缺血再灌注(I/R)小鼠记忆功能的保护作用及其机制。方法采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑I/R损伤模型，进行穿梭实验，观察大黄酚(10.0、1.0、0.1mg/kg，腹腔注射)对脑I/R小鼠记忆功能的保护作用，并对各剂量组脑组织和血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活力进行测定，以及小鼠亚硝酸钠中毒缺氧后存活时间的测定。结果大黄酚可明显改善脑I/R损伤所致的记忆障碍，增加GSHPx、SOD活力，延长缺氧后存活时间。结论大黄酚对脑I

2、/R损伤小鼠记忆功能有保护作用，其作用机制可能是通过增强GSHPx、SOD活力，提高脑组织对氧自由基的清除能力，从而减轻I/R引起的脑组织损伤。【关键词】大黄酚;脑缺血再灌注;学习记忆;谷胱甘肽过氧化物酶;超氧化物歧化酶;缺氧9以往研究证明，大黄酚可显著抑制大鼠肝、脑组织过氧化脂质的生成，具有抗衰老作用〔1〕。但大黄酚对脑缺血再灌注(I/R)记忆功能的影响，尚未见报道。本实验旨在采用改进的Himori法〔2〕暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑I/R损伤模型，研究大黄酚对脑I/R小鼠记忆功能的保护作用，探讨其对脑I/R损伤后记忆功能的保护作用机制，为其应用于临床治疗血管性痴呆疾病提供理论和

3、实验依据。　　1材料与方法　　1.1动物昆明种小鼠，体重(28±2)g，均为雄性，由中国医学科学院药物研究所动物实验中心提供〔许可证号：SCXK(京)20040001〕。　　1.2主要药品、试剂和仪器大黄酚(纯度≥98%，批号110796200412，中国药品生物制品检定所)，实验前用N，N二甲基甲酰胺溶解，聚山梨酯80助溶，生理盐水稀释至所需浓度，N，N二甲基甲酰胺∶聚山梨酯80∶生理盐水的比例为1∶1∶8。谷光甘酞过氧化物酶(GSHPx)活力测试盒，超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(南京建成生物工程研究所);亚硝酸钠(NaNO2)(天津市化学试剂一厂)。XCS2小鼠穿梭

4、程序自动控制仪(中国医学科学院药物研究所);753BI微机型紫外可见分光光度计(上海光学仪器制造厂);Forma86cULT冰柜(-80℃，美国热电公司);Sigma3K30高速冷冻离心机(德国Sigma公司)。　　1.3方法9　　1.3.1小鼠脑I/R模型的制备在Himori法〔2〕基础上进行改进。3.5%水合氯醛(10ml/kg,腹腔注射)麻醉小鼠后，仰卧位固定，自胸骨柄到下颌骨间行5～8mm正中纵向切口，分离两侧颈总动脉，分离后用液体石蜡浸泡过的黑色手术线穿过左右二侧颈总动脉，尽量恢复两侧颈总动脉到原位，在气管上方轻轻将黑色手术线打一松的反手结，结的松紧以不压迫气管为宜。在每侧颈

5、总动脉上方的黑线上穿过一条用液体石蜡浸泡过的白色手术线，按Himori法埋线后缝合切口。术后48h将颈下部黑色手术线拉紧,阻断两侧颈总动脉造成大脑缺血状态，5min后轻拉两侧白色手术线，使颈总动脉恢复血液再灌注。　　1.3.2动物分组及给药每项实验均取小鼠70只，手术后48h将小鼠随机分为5组，假手术组(进行手术，但不进行脑I/R)、I/R模型组(模型组)、药物组(模型+大黄酚);药物组分高、中、低剂量组，于缺血前30min分别腹腔注射大黄酚10.0、1.0、0.1mg/kg，模型组于缺血前30min腹腔注射溶剂10ml/kg，假手术组腹腔注射溶剂10ml/kg。　　1.3.3穿梭实验X

6、CS2小鼠穿梭程序自动控制仪，底部为不锈钢栅，栅间距为0.5cm，加非条件刺激时有电流通过，电击动物足底。顶部配置有噪声发生器(铃声刺激)，用来产生条件刺激。在安静环境中，每天8:00～12:00进行实验，室温(22±2)℃。程序设置为：蜂鸣5s，继之电刺激15s，间隔159s,而后重复上述程序,如此循环20次。电脑将自动记录小鼠遭受电击次数、电击时间及主动逃避时间等参数，以评价小鼠的学习记忆能力。每次实验测试前先把小鼠放入穿梭箱中，让小鼠在箱内自由活动5min，以消除其探究反射。然后正式进行学习穿梭训练，记录小鼠被电击次数、电击时间和主动逃避时间。除假手术组外，其余各组于训练后使脑缺

7、血5min，然后恢复血流。24h后测试记忆成绩。　　1.3.4小鼠全血、脑组织GSHPx和血浆、脑组织SOD活力测定除假手术组外，其余各组均于48h后立即缺血5min，然后恢复血供后10min，将小鼠的颈动脉切开取血,肝素抗凝，并快速断头取其脑组织置于Forma86cULT冰柜内冷冻贮存。将抗凝全血用三蒸水制成1%溶血液，并将脑组织制成10%脑匀浆。以GSHPx试剂盒测定小鼠全血及脑组织中GSHPx活力。以SOD试剂盒测定小