抗黄曲霉毒素m1抗体制备及检测方法建立

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1、抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立【关键词】黄曲霉毒素M1；单克隆抗体；酶联免疫吸附试验　　摘要：目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术，建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为28×10-11mol/L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素

2、G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为007ng/ml，校正曲线的线性范围为002～2ng/ml，线性方程y=-04364x+02693(R2=09949)。方法的加标回收率为725%～1313%。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。　　关键词：黄曲霉毒素M1；单克隆抗体；酶联免疫吸附试验　　Developmentofmonoclonalantibodyagainstafl

3、atoxinM1andimmunoassayforaflatoxinM1　　　　　　Abstract：ObjectiveTopreparemonoclonalantibodyagainstaflatoxinM1anddevelopindirectpetitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofaflatoxinM1.MethodsHybridomacelllineexcretingmonoclonalantibodyagainstaflatoxinM1atechniqueanddevelopindirec

4、tpetitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofaflatoxinM1.ResultsOnehybridomacelllineexcretingmonoclonalantibodiesagainstaflatoxinM1coded2F2urineSp2/0cellsBALB/cmiceimmunizedonoclonalantibodyproducedbythehybridomacellacellol/L.Themonoclonalantibodyobtainedinthepresentstudyong

5、themonoclonalantibodiesagainstaflatoxinM1itofdetectingconcentrationofaflatoxinM1l.Thelinearrangeofstandardcurvelandthelinearequationonoclonalantibodyobtainedinthestudyplefastsensitiveindirectpetitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayforthedetectionofaflatoxinM1onoclonalantibody;enzyme-l

6、inkedimmunosorbectassay　　黄曲霉毒素M1(aflatoxinM1,AFM1)是动物摄入黄曲霉毒素B1(AFB1)后在体内经羟基化代谢的产物，存在于动物体内可食部分，如乳、肝、蛋类等，其中以乳最为常见，且乳与乳制品中的AFM1在生产和贮藏期间相对稳定，巴氏消毒难以破坏〔1〕。AFM1的急性毒性与AFB1大致相同，可引起实验动物发生肿瘤〔2〕，50μg/(kg・ble公司)；普通离心机(北京医用离心机厂)；电泳仪(美国BIO－RAD公司)；微量可调移液器(法国Gilson公司)；细胞培养板(96孔(美国Costar公司)；24孔

7、(美国Gibco公司)；酶标板(96孔，美国Corning公司)。　　112试剂黄曲霉毒素M1，黄曲霉毒素M1-BSA偶联物(AFM1-BSA)、牛血清白蛋白(BSA)、抗体亚类测定试剂盒(IgM,IgG,IgA,IgD,IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3)、黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1)、黄曲霉毒素B2(AflatoxinB2)、黄曲霉毒素G1(AflatoxinG1)和黄曲霉毒素G2(AflatoxinG2)(美国Sigma公司)。RPMI1640培养基，选择性培养基，福氏佐剂(完全、不完全)、二甲基亚砜(DMSO)，3,3′,5,5′四甲

8、基联苯氨(TMB)、吐温