浅论抗黄曲霉毒素m1抗体制备及检测方法建立

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1、浅论抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立【黄曲霉毒素M1；单克隆抗体；酶联免疫吸附试验　　：目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术，建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为28×10-11mol/L。该抗体和黄曲霉

2、毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为007ng/ml，校正曲线的线性范围为002～2ng/ml，线性方程y=-04364x02693(R2=09949)。方法的加标回收率为725%～1313%。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。　　：黄曲霉毒素M1；单克隆抗体

3、；酶联免疫吸附试验　　DevelopmentofmonoclonalantibodyagainstaflatoxinM1andimmunoassayforaflatoxinM1　　　　　　Abstract：ObjectiveTopreparemonoclonalantibodyagainstaflatoxinM1anddevelopindirectpetitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofaflatoxinM1.MethodsHybrido

4、macelllineexcretingmonoclonalantibodyagainstaflatoxinM1atechniqueanddevelopindirectpetitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofaflatoxinM1.ResultsOnehybridomacelllineexcretingmonoclonalantibodiesagainstaflatoxinM1coded2F2urineSp2/0cellsBALB/cmic

5、eimmunizedonoclonalantibodyproducedbythehybridomacellacellol/L.ThemonoclonalantibodyobtainedinthepresentstudyongthemonoclonalantibodiesagainstaflatoxinM1itofdetectingconcentrationofaflatoxinM1l.Thelinearrangeofstandardcurvelandthelinearequationonoclonala

6、ntibodyobtainedinthestudye-linkedimmunosorbentassayforthedetectionofaflatoxinM1onoclonalantibody;enzyme-linkedimmunosorbectassay　　黄曲霉毒素M1(aflatoxinM1,AFM1)是动物摄进黄曲霉毒素B1(AFB1)后在体内经羟基化代谢的产物，存在于动物体内可食部分，如乳、肝、蛋类等，其中以乳最为常见，且乳和乳制品中的AFM1在生产和贮躲期间相对稳定，巴氏消毒难以破坏〔1〕。

7、AFM1的急性毒性和AFB1大致相同，可引起实验动物发生肿瘤〔2〕，50μg/(kg・b1可致大鼠肝癌及结肠腺癌〔3〕，此外尚有AFM1引起牙原性肿瘤的报道〔4〕。鉴于AFM1对人类健康构成潜伏的威胁，在我国食用乳和乳制品者又多为婴幼儿、老年人和体弱多病者，因此，必须对其含量进行监控，限制AFM1在牛奶或乳制品中的污染水平，达到保护消费者健康的目的。因此，建立精确、简便、快速、灵敏、回收率高、不需非凡设备和可在基层实验室开展的检测分析方法十分必要。本文旨在制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并

8、对抗体特性进行鉴定，为进一步研制具有我国自主知识产权的免疫学快速检测试剂盒提供技术支持。　　1材料和方法　　11材料　　111器材CO2培养箱(美国Queue公司)；洁净工作台(北京半导体设备一厂)；生物颠倒显微镜(日本欧林巴斯光学株式会社)；酶标分析仪(瑞士SUNRISE公司)；电子分析天平(瑞士Mettler公司)；低温高速离心机(德国Hermle公司)；普通离心机(北京医用离心机厂)；电泳仪(美国BIO－RAD公司)；微量可调移液器(