黄曲霉毒素m1检测-ppt

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1、乳制品中黄曲霉毒素M1的检测林钦福建省产品质量检验研究院食品检验研究所0591-83762000phlqfcii@126.com黄曲霉毒素黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。B1、B2和G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。B1和B2被奶牛吃了之后，分别有一小部分会转化为M1和M2进入奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源。黄曲霉毒素M1限量GB2761-2011食品安全国家标准食品中真菌毒素限量黄曲霉毒素M1检测方法1，薄层层析法2，液

2、相色谱法3，免疫化学分析方法（1）免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和柱-HPLC法（2）酶联免疫吸附法：（3）微柱筛选法黄曲霉毒素M1检测方法GB5009.24-2010食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定GB5413.37-2010食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定GB/T23212-2008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-荧光检测法GB/T18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法黄曲霉毒素M1检测方法GB2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定的检测方

3、法。黄曲霉毒素M1检测方法GB5009.24-2010《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定》采用薄层层析法，灵敏度差，定量不准，但适合缺少检测设备的企业进行日常监控。黄曲霉毒素M1检测方法GB5413.37-2010食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定第一法免疫亲和层析净化液相色谱—串联质谱法第二法免疫亲和层析净化高效液相色谱法第三法免疫层析净化荧光分光度法第四法双流向酶联免疫法第一法免疫亲和层析净化液相色谱—串联质谱法原理试样液体或固体试样提取液经均质、超声提取、离心，取上清液经免疫亲和柱净化，洗脱液经氮气吹干，定容，微孔滤膜过滤，经液相色谱分离，电喷雾离子源离子化

4、，多反应离子监测（MRM）方式检测。基质加标外标法定量。第二法免疫亲和层析净化高效液相色谱法原理亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。SPE设备M1免疫亲和净化柱有1ml和3ml管两种，3ml比较好操作。活化：柱中PBS缓冲液滴完后再加入3ml水滴至填料上约1cm关闭阀门，待上样。操作步骤牛奶或酸牛奶样品：称取25g样品，调pH7.4（纯牛奶一般

5、可不调），加入水定容50ml，振摇混匀，10000r/min高速离心。用吸管吸取中间清液到25.0ml比色管中，过免疫亲和净化柱，用3ml水淋洗，抽干，3ml甲醇洗脱（先浸泡1min再打开阀门），将洗脱液于40℃,氮吹近干，加10%乙腈定容1.0ml，涡旋混匀、离心、滤膜过滤，待测。操作步骤奶粉样品：称取5g样品，加入30ml水，超声震荡15min溶解，加入水定容50ml，振摇混匀，10000r/min高速离心。用吸管吸取中间清液到25.0ml比色管中，过免疫亲和净化柱，用3ml水淋洗，抽干，3ml甲醇洗脱（先浸泡1min再打开阀门），将洗脱液于40℃,氮吹近干，加10%乙腈定容1.0ml，涡

6、旋混匀、离心、滤膜过滤，待测。液相法色谱条件色谱柱为XB-C18色谱柱（150mm×4.6mm,5μmi.d.）；柱温为35℃；流速为1.0mL/min；流动相A为水，B为甲醇，进样量50μL；检测波长：Ex365nm，Em435nm。时间流速%水%甲醇曲线101.0065.035.0/26.001.0060.040.06310.001.0055.045.06414.001.0020.080.011517.001.0065.035.011622.001.0065.035.011谱图色谱条件如同时检测AFB1、B2、G1、G2和M1可采用GB/T23212-2008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B

7、2、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-荧光检测法使用柱后衍生法，衍生液为50mg/L的过溴化氢溴化吡啶：称取50mg过溴化氢溴化吡啶加入50ml乙腈溶解，加纯水定容1000ml，混匀，避光，备用。衍生剂流速：0.3ml/min衍生温度：35℃波长：Ex355nm，Em430nmWaters二元柱后衍生系统谱图液质法条件色谱柱为BEH-C18色谱柱（100mm×2.1mm,1.7μmi.d.）；