乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案.doc

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1、乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案近日，蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测？现整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。1.试用范围牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品2.方法原理黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。3.所需设备和耗材黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom?IAC(1m

2、l，25支/盒；3ml，15支/盒)（上海月旭提供）；高效液相装置带荧光检测器；均质机；水平振荡器；SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom?SPEAdapter（上海月旭提供）；分析天平（精度0.02g)；SPE装置带抽真空系统：Welchrom?SPEDevice（上海月旭提供）；黄曲霉毒素M1标准品；PBS缓冲溶液：称取1.16gNa2HPO4，0.20gKH2PO4，8gNaCl和0.2gKCl溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；正己烷（分析纯）。4.样品前处理牛奶样品1

3、.称取25g(精确至0.01g)混匀的样品，置于50mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37℃，6000r/min下离心10min。收集全部上清液，待净化；2.发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)3.称取25g(精确至0.01g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5min，水浴加热至35℃～37℃，6000r/min下离心10min。收集全部上清液，待净化。4.乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品5.称取10g(精确至0.01g)样品置于250mL烧杯中，加入50mL约50℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室

4、温，移入100mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15min，混合上清液，取50mL上清液待净化。干酪切取均质的样品5g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加2mL水和30mL甲醇，9500r/min下匀浆5min，超声提取30min，6000r/min下离心10min。收集上清液并移入250mL分液漏斗中，同时加入30mL正己烷，振摇2min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5mL分2次洗涤并倒入50mL离心管中，加PBS溶

5、液稀释至50mL，6000r/min下离心5min，上清液待净化。奶油称取5g(精确至0.01g)试样，置于50mL烧杯中，用20mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振荡30min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。5.免疫亲和柱净化（3cc）1.将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10mlPBS溶液活化柱子，流速保持在2–3ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；2.将待

6、净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5mL/min，不收集流出液；3.用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液；4.用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用6.色谱条件：色谱柱：Ultimate?XB-C18250mmx4.6mm，5μm（上海月旭提供）预柱：Ultimate?C18，5μm，ULT5BG18（上海月旭提供）流动相：水:甲醇:乙腈=11:4:5柱温：35℃检测波长：发射波长：365nm，激发波长：450nm进样量：100μL