牛奶中黄曲霉毒素m1的检测方法

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1、牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法食品质量与安全王婉婷摘要：采用免疫亲和柱—荧光光度法快速测定和微细柱快速检测方法测定牛乳中黄曲霉毒素M1，方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。关键词：牛奶；黄曲霉毒素M1；快速检测Rapiddetectingaflatoxinm1inmilkStudentmajoringinFoodQualityandSafetyWangWantingAbstract:AflatoxinM1inmilkareextractedandseparat

2、edbyimmunoaffinitycolumnandMicrocolumnforrapiddetectionmethodKeywords:milk;rapiddetectingaflatoxinM1;aflatioxinM1immunoaffinitycolumn一．前言近代研究表明当奶牛食用饲料中含有黄曲霉素Bl时,牛奶和其他乳制品会含有黄曲霉素Ml［1］。黄曲霉毒素Ml的毒性和致癌性与黄曲霉毒素Bl的基本相似。由于牛乳及其制品是人类特别是婴儿的主要食品，因此各国对其限量的要求十分严格。我国

3、及许多国家规定牛奶及奶制品中黄曲霉毒素Ml的含量不得超过0.5ugkg；所以，快速、方便、准确的检测方法在牛奶的检测中十分重要，二．主要检测方法2.1免疫亲和柱—荧光光度法快速测定2.1.1测定原理：试样经过离心、脱脂、过滤后，滤液经过键合有黄曲霉毒素Ml特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素Ml具有专一的识别能力，黄曲霉毒素Ml键合在分离柱中的抗体上。用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20的混合液通过分离柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵

4、敏度。衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml。2.1.2仪器设备与试剂系列真菌毒素专用荧光光度计（进口）；离心机（相对加速离心力大于2000g）；空气压力泵；玻璃试管（12mm*75mm，无荧光特性）玻璃纤维滤纸（直径11m，孔径0.5um）黄曲霉毒Ml免疫亲和柱进口）甲醇为液相色谱级纯；氯化钠为分析纯；溴储备液（0.01﹪）：称取适量溴溶于水，配成质量分数为0.01﹪的储备液，避光保存溴水使用液（0.002﹪）：取10ml质量分数为0.01﹪的溴溶液加入40ml水混匀，于棕色瓶中保存

5、备用（需现用现配）。荧光光度计标定溶液（进口）：红色标定管（内含0.00680g二水硫酸奎宁，20ml浓度为0.05molml硫酸溶液，此溶液相当于2ngg黄曲霉毒素Ml标准溶液；黄色标定管内含0.00340g二水硫酸奎宁，2ml浓度为0.05molml硫酸溶液，此溶液相当于1ngg黄曲霉毒Ml标准溶液）；绿色标定管（内含2ml浓度为硫0.05molml酸溶液，此溶液不含黄曲霉毒素Ml）。2.1.3分析步骤(1)样品提取液体牛乳及牛乳制品：量取50ml液体样品，加入1.0g氯化钠，在离

6、心机上以2000g离心10min，仔细地将用于牛奶分析的有效部分低层移取，不要扰动顶部脂肪层，将脱脂的牛奶以玻璃纤维滤纸过滤。(2)净化将免疫亲和柱连接于10ml玻璃针筒下。准确移取10.0ml上述澄清滤液注入玻璃针筒中，将空气压力泵与针筒连接，调节压力使溶液以约6mlmin流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2-3空气通过柱体。以10ml甲醇与水之比为10:90的混合液清洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2-3空气通过柱体。准确加入1.0ml甲醇与水之比为80:20的混合液洗脱，流速为1-2mlmi

7、n，收集洗脱液于玻璃试管中，供检测用。(3)测定荧光光度计校准：在激发波长360nm，发射波长50nm条件下，以绿色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为0.0；以红色标定管调节荧光光度计的荧光强度值读数为2.0；以黄色标定管验证荧光光度计的荧光强度值读数应该为1.0±0.2。样液测定：取上述洗脱液加入1.0ml质量分数为0.002﹪溴溶液，于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml含量。(4)结果计算荧光光度计测定结果按下式计算X=cV/m(10）式中：X为试样中黄曲霉毒素Ml含量，（ugkg）；c为

8、荧光光度计中读取的样液中黄曲霉毒素Ml的浓度（ngml）；V为样液最终定容体积（ml）；m为最终样液所代表的试样量（g）。2.2微细柱快速检测方法黄曲霉素的Ml微细柱快速检测方法,检测范围大约为0.2ug/kg,能够应于工厂,Holaday于1969年首先引人了微细柱技术［2］。随着这技术的发展,微细柱技术得到了若干改进。Romer等对微细柱技术的进展作了很好的概述［3］。本方法对此技术的改进,在于减少每次洗涤玻璃器皿的时间,从而减少了费用,并减少黄曲霉素Ml带到下一个样品中去。2.2.1仪器