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时间:2018-12-22
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1、黄曲霉毒素M1如何检测 黄曲霉毒素M1是一种强致癌物,它一度存在于一些纯牛奶中,引起食品安全隐患的讨论。相比三聚氰胺,黄曲霉素是否更难检测?这里,环凯技术整理出全套的专业检测方法,让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处遁形。 检测范围 牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等乳制品 检测原理 黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。 设备耗材 黄曲霉毒素免疫亲和柱 高效液相装置带荧光检测器 均质机 水平
2、振荡器 SPE转接头及50ml大容量上样器 分析天平(精度0.02g) SPE装置带抽真空系统 黄曲霉毒素M1标准品 PBS缓冲溶液:称取1.16gNa2HPO4,0.20gKH2PO4,8gNaCl和0.2gKCl溶于900ml水中,用HCL或NaOH调节pH至7.4,然后定容至1000ml; 甲醇(色谱纯) 乙腈(色谱纯) 正己烷(分析纯) 样品前处理 牛奶样品 1.称取25g(精确至0.01g)混匀的样品,置于50mL具塞离心管中,水浴加热至35℃~37℃,6000r/min下离心10min。收集全部上清液,待净化; 2.发酵乳(包括固体
3、状、半固体状和带果肉型) 3.称取25g(精确至0.01g)混匀的样品,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4,9500r/min下均质5min,水浴加热至35℃~37℃,6000r/min下离心10min。收集全部上清液,待净化。 4.乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品 5.称取10g(精确至0.01g)样品置于250mL烧杯中,加入50mL约50℃的水于乳粉中,玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温,移入100mL容量瓶中,水洗烧杯并转移洗涤液,用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15min,混合上清液,取50mL上清液待净化。 干酪 食品
4、检测方法:切取均质的样品5g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加2mL水和30mL甲醇,9500r/min下匀浆5min,超声提取30min,6000r/min下离心10min。收集上清液并移入250mL分液漏斗中,同时加入30mL正己烷,振摇2min,分层后,弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2mL,转移浓缩液至离心管,烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5mL分2次洗涤并倒入50mL离心管中,加PBS溶液稀释至50mL,6000r/min下离心5min,上清液待净化。 奶油 食品检测方法:称取5g(精确至0.01g)试样,置于50mL烧杯中,
5、用20mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20mL水和30mL甲醇,振荡30min后,将全部液体移于分液漏斗中,待分层后,将下层溶液全部移到100mL圆底烧瓶中,旋转蒸发仪减压浓缩至约5mL,加PBS稀释至约50mL,待净化。 免疫亲和柱净化 1.将IAC装于固相萃取装置上,接上大体积上样器,10mlPBS溶液活化柱子,流速保持在2–3ml/min,确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液,活化液不收集; 2.将待净化液加入免疫亲和柱,流速不超过5mL/min,不收集流出液; 3.用约20ml去离子水淋洗柱子,流速不超过5mL/min,抽
6、真空1分钟,不收集流出液; 4.用1.5ml甲醇洗脱,流速控制在1d/s,收集洗脱液过膜后上机测试。
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