硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞黏附以及整合素β1蛋白表达的机制研究

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1、硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞黏附以及整合素β1蛋白表达的机制研究：徐远义，黄允宁，王炜，马竟先，董俭达，柳勇，高宏，曹相枚，赵琳【摘要】［目的］探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MKN1细胞的黏附抑制作用机制。［方法］分别在培养液中加入DS或PBS对MKN1细胞进行培养，用荧光免疫细胞染色法进行染色，用共聚焦显微镜对固定细胞和活细胞在培养盘上的贴壁过程及形态变化进行观察，用KN1细胞形成伪足并与其他细胞接触形成单细胞层。整合素β1在细胞膜上有强表达并形成集落。DS使MKN1细胞的伪足缩短，表现出维持圆形形状的倾向；抑制整合素β1的表达并使已经形成的整

2、合素集落区域减少。MKN1细胞表达了整合素β1的两种形式(130kDa和110kDa)，实验组贴壁细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到对照组细胞的64%(130kDa)和57%(110kDa)，实验组游离细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到对照组细胞的51%(130kDa)和15%(110kDa)。［结论］DS对人胃癌细胞MKN1黏附过程的抑制与整合素β1蛋白表达的减少有关。【关键词】胃肿瘤TheMechanismofDextranSulfateInhibitingCells’AdhesionandIntegrinβ1ExpressioninHuma

3、nGastricCancerCellLineAbstract:［Purpose］ToexploremechanismoftheadhesionofhumangastriccancerMKN1cellsinhibitedbydestransulfate(DS).［Methods］MKN1cellsmunofluorescentcytochemistryandobservedinfixedorlivingconditionsbyconfocallaserscanningmicroscope.KN1cellsexpressedtsofintegrinβ

4、1(130kDaand110kDa).Bothformsofintegrinβ1proteinexpressionoftheattachingcellsintheexperimentalgroupdecreasedto64%(130kDa)and57%(110kDa)ofthoseinthecontrolgroup,theintegrinβ1proteinexpressionofthefloatingcellsintheexperimentalgroupdecreasedto51%(130kDa)and15%(110kDa)ofthatinthe

5、controlgroup.［Conclusion］DSinhibitingMKN1cells’adhesionisrelatedtodecreaseofintegrinβ1expression.Keys;integrinβ1胃癌腹膜种植转移的机制尚不十分清楚。一般认为癌细胞浸润胃壁浆膜层并脱离癌组织母体进入腹腔，成为有生物活性的脱落癌细胞，黏附于腹膜并增殖形成种植转移灶[1]。在这过程中细胞黏附是一个重要环节。临床研究证明胃癌患者整合素β1表达的增强与癌的转移和腹腔种植有关[2]。近来研究表明硫酸右旋糖苷(DS)具有抗恶性肿瘤细胞黏附的作用[3]

6、。本实验对使用DS后胃癌MKN1细胞黏附和整合素β1的表达和调节进行了研究，为寻找新的肿瘤治疗方法提供依据。1材料与方法1.1材料细胞：人胃癌MKN1细胞株购自日本癌研究资源库。细胞保存在含有10%小牛血清(FBS)的RPMI-1640培养液中，在37℃，5%CO2的条件下培养。药物：将硫酸右旋糖苷（分子量500000）以2%浓度溶于磷酸缓冲液(PBS)中，用22μｍ的过滤器灭菌。实验组DS的最终浓度为0.4%，对照组用相同容量的PBS代替DS。抗体：本实验使用羊抗人单克隆抗体，FITC标记的抗整合素β1抗体。兔抗羊复合AlexaFlour546

7、IgG和兔抗羊IgG。1．2方法相差显微镜观察：将细胞(5×104细胞/孔)培养于75ml培养盘中，设DS实验组和PBS对照组。4h时后在位相差显微镜下观察。实验观察到实验组有大量细胞呈游离状态，其成活率高于90%，遂收集游离细胞用于蛋白测定。同时用0.25%的胰酶分离贴壁细胞用于蛋白测定。荧光免疫细胞染色：置MKN1细胞于单左旋赖氨酸(PLL)包被的35mm玻璃底面培养盘中，用含有DS或PBS的培养液培养。培养时间2h。用PBS冲洗后用4%福尔马林/PBS在37℃下固定15min，然后与抗整合素β1单克隆抗体反应，4℃，12h，抗体浓度为1∶1

8、00。用PBS反复冲洗后，在暗处与兔抗羊复合AlexaFlour546IgG（1/1000）反应2h。用共聚焦显微镜(德国产LSM510