抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究

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1、•论著•抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究张静,杜昱蕾【摘要】目的研究针对胰岛素基因增强结合蛋白1(ISL1)的小干扰RNA(siRNA)对人胃癌干细胞特性的影响。方法体外合成ISL1的siRNA,转染入胃癌细胞系BCC823和BGC-S,逆转录酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测ISL1基因和蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞存活率。结果构建的针对ISL1基因的siRNA能够显著抑制靶基因ISIJmRNA和ISL1蛋白的表达。转染48h后BGC823和BGC・S细胞的存活率明显下降。结论siRNA能明显抑

2、制胃癌细胞BGC823和BGC-S的ISLI表达,从而对进一步研究胃癌干细胞奠定了基础°［关键词】RNA干扰;胰岛素基因增强结合蛋白1;逆转录酶链式反应;Western-blot［中图分类号】R735.2【文献标识码】A［文章编号】1674-3296(2013)02B-0003-03StudyofinhibitionofISLIexpressionongastriccancerstemcel)characteristicsZHANGJing9、DUYu-lei.*ChengdeMedicalVniversity,Chengd

3、e,Hebei067000,China[Abstract]ObjectiveToresearchtheeffectofinhibitionofsmallinterferenceRNA(siRNA)insulingeneenhancebindingprotein1(ISLI)expressionongastriccancerstemcellcharacteristics・MethodsSynthetizedsiRNAofISLIintvitro.AndthehumangastriccancercelllinesBGC823an

4、dBGC-Sweretransfected.TheISLIgeneanditsproteinexpressionchangesweredetectedbyreversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT-PCR)andwesternblotting.ThecellsurvivalratewasmeasuredbyMTTassay.ResultsThesiRNAtargetingtheISLIgenecaninhibittheexpressionoftargetgeneISLImRN

5、Aobviously,andcaninhibitISLIproteinexpression.After48hours,thesurvivalrateofBGC823andBGC-Scelldeclineddramatically.ConclusionsiRNAcouldsignificantlyinhibitthegastriccancercelllineBGC823andBGC-SISLIexpressionJnordertolaythefoundationforfurtherstudyofgastriccancers

6、temcells・[Keywords]RNAinterference；ISLI；RT-PCR；Westem-blotting胃癌是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤，具有发病率高、病死率高、早期诊断率低、生存率低等特点。其化疗失败的主要原因是癌细胞耐药性的产生。研究表明，肿瘤干细胞的某些特征正是使其能够逃脱多种化疗药物的作用而得以存活的耐药机制。胰岛素基因增强结合蛋白KISL1)为转录调节因子一IsIeM，其对胰岛细胞成熟、增殖和分化具有重要作用。以往研究发现其与消化道肿瘤有密切关系,并在胃癌侧群细胞中高表达。因此，抑制ISL

7、I基因对胃癌干细胞特性影响的研究具有重要的理论和实践意义。笔者采用RNA干扰技术，在体外合成能够特异性抑制ISL1基因表达的小干扰RNA(siR-NA),转染人胃癌细胞BGC823和BGC-S,用逆转录酶链式反应(R1-PCR)和Westernblot方法检测转染后胃癌细胞ISL1基因的表达情况。1材料与方法1.1材料siRNA购自上海吉玛公司，转染试剂】ipo・fectamin2000购自invitrogen公司，反转录试剂盒购自Fermentas公司,ISLI抗体购自sebt公司，蛋白印迹相关试剂购自SantaCruz,

8、人胃癌细胞系BGC823和BGC-S由本实验室提供。胃癌细胞BGC823和BGC-S培养于含100ml/L小牛血清J00ku/L青帝素和100mg/L链霉素的KPMI1640培养基，培养条件为作者单位：067000河北省承德医学院2010级研究生(张静)；050048石家庄市，中国人民解放