胃癌干细胞的分离鉴定以及干细胞特性研究.pdf

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1、胃肠病学2014年第19卷第9期·517··论著·胃癌干细胞的分离鉴定以及干细胞特性研究冰李霞徐桂芳坤张伟杰周志华。郭明邹晓平南京大学医学院附属鼓楼医院消化内科’(210008)急诊外科解放军第101医院病理科。南京中医药大学背景：肿瘤干细胞(CSCs)已成为当前肿瘤研究的热点之一，开展相关研究的首要问题是CSCs的分离和鉴定，悬浮培养法是分离CSCs的重要方法。目的：分离、鉴定胃癌干细胞(GCSCs)并评价其干细胞特性。方法：人胃癌细胞株MKN45、MGC803、SGC7901以含表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基悬浮培养。对培养得到的第三代肿瘤球，以集

2、落形成实验检测其克隆形成能力，免疫荧光法检测GCSCs标记物，细胞划痕实验和Transwell小室细胞侵袭实验检测其迁移、侵袭能力，CCK一8实验检测其对顺铂的耐药性。结果：培养得到的肿瘤球高表达干细胞标记物CD44、CD54，低表达胃壁细胞标记物H／KATPase，克隆形成能力、划痕愈合速度和Transwell小室穿膜细胞数明显大于或多于普通胃癌细胞，差异有统计学意义(P<0．05)。顺铂对肿瘤球的50％抑制浓度明显高于普通胃癌细胞。结论：应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得GCSCs富集的肿瘤球；肿瘤球具有较强的自我更新、增殖、迁移、侵袭能力和多向分化潜能，对化疗药物更易产生耐药性。关键词

3、胃肿瘤；肿瘤干细胞；肿瘤球；肿瘤侵润；肿瘤转移；抗药性，肿瘤Isolation，IdentificationandStemnessCharacteristicsofGastricCancerStemCeHsXia，XUGu洳ng，ZHANG眈批。，ZHOUZhihtta，GUOMing4，ZOUXiaoping．DepartmentofGastroenterology，。DepartmentofEmergencySurgery，NanjingDrumTowerHospital，theAffiliatedHospitalofNangUniversityMedicalSchool，Nang(210

4、008)；DepartmentofPathology，thelOlstHospitalofPLA，Wuxi，JiangsuProvince；NangUniversityofChineseMedicine，NanfingCorrespondenceto：ZOUXiaoping，Email：13770771661@163．cornBackground：Recently，cancerstemceUs(CSCs)hasbecomeahottopicincancerresearch．Forthisresearchtopic，theprimaryproblemistheisolationandidenti

5、ficationofCSCs，andsuspensioncultureisconsideredtobeanimportantmethodforCSCsisolation．Aims：Tostudytheisolationandidentificationofgastriccancerstemcells(GCSCs)andevaluateitssternnesscharacteristics．Methods：GCSCs．1ikecellswereenrichedthroughspheroidformationbysuspendingthehumangastriccancercelllinesMKN

6、45，MGC803andSGC7901inseiMm-freemediumcontainingepidermalgrowthfactor(EGF)andbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)．Thethirdgenerationtumorspheresobtainedweretestedf0rtheabilityofcolonyforming；itssternnessmarkerswereidentifiedbyimmunofluorescentstaining，andmigrationandinvasioncapabilitieswereassessedbywou

7、ndscratchtestandTranswellassay，respectively．GrowthinhibitionoftumorspheresinresponsetocisplatinwasassessedbyCCK-8assay．Results：HighexpressionsofstemcellmarkersCD44andCD54wereobservedinthetumorspheres，