过表达vcam-1对间充质干细胞免疫特性的影响

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1、万方数据硕士学位论文学校代码10533密级坌珏过表达VCAM-1对间充质干细胞免疫特性的影响EffectsofoverexpressionofVCAM--1onimmunologiccharacteristicsofmesenchymalstemcells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：昌Ij指导教师：陈慧临床医学内科学湘雅三医院胡亮钉教授张毅教授论文答辩日期竺!!：兰：!三答辩委员会主席中南大学2014年5月学位论文原创性声明删2删687973万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中

2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：睦蔓日期：竺!±年上月旦日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本

3、学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：鉴垫聊签舭万方数据过表达VCAM．1对间充质干细胞免疫特性的影响摘要目的：克隆小鼠血管细胞粘附分子l(vascularcelladhesionmolecule．1，VCAM一1)cDNA全长，构建绿色荧光蛋白标记的VCAM．1基因逆转录病毒载体。探讨VCAM一1基因在间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)@过表达对细胞免疫学特性的影响，为优化MSC的临床应用提供依据。方法：采用DNA重组技术，将目的基因VCAM一1克隆至含有报告基因EGFP的逆转录病毒表达载体MIGRl中；在脂质体介导下，将重组的逆转录

4、病毒表达质粒转染293T细胞，收获携带VCAM．1基因的重组逆转录病毒的上清，并感染MSC细胞系C3H10T1／2，荧光显微镜下观察细胞形态和感染效率；流式细胞术检测MSC膜表面的VCAM．1表达情况；3H．TdR掺入法测定过表达VCAM．1的MSC对其免疫学特性的影响。结果：成功构建过表达VCAM．1基因的逆转录病毒载体，流式细胞术检测结果表明VCAM．1在MSC细胞系C3H10T1／2中稳定高表达。进一步，过表达VCAM．1基因的MSC细胞系C3H10T1／2形态无改变。与转染空载体的C3H10T1／2相比，过表达VCAM．1的C3H10T1／2对于有丝分裂原诱导的T淋巴

5、细胞增殖抑制作用显著增强，且这种抑制效应呈剂量依赖性，随着C3H10T1／2细胞数量的逐渐增加，其抑制效应逐渐增强。当C3H10T1／2与效应细胞比例为1：10时，转染了空载体的C3H10T1／2组淋巴细胞增殖活。I生(cpm值)降万方数据低了29．8％，而过表达VCAM。1的C3H10T1／2组则降低了65．3％，，抑制率是空载体C3H10T1／2组的2．16倍。结论：过表达VCAM一1可显著增强间充质干细胞系C3H10T1／2抑制T细胞活化的能力，为下一步利用过表达VCAM一1的MSCs治疗相关免疫疾病奠定了实验基础和理论依据。图9幅，表13个，参考文献53篇。关键词：血

6、管细胞粘附分子1；问充质干细胞；免疫抑制分类号：R457．7万方数据EffectsofoVerexpressionofVCAM一1onimmunologic’aracteristicsofmesenchyma’stemcellsCIImesenchymalstemcellsaraCterlStlCS0IAbstractObjective：ThisstudywasaimedtocloneVCAM一1cDNAgeneandtoconstructretrovirusvectorPMSCVmigr-1一VCAM一1，exploredtheeffectofover—expression

7、ofVCAM一1geneinmesenchymalstemcell(MSC)ontheimmunologicalcapacityofMSCtoprovideabasisforoptimizingclinicaluseofMSC．Methods：ThecDNAencodingmouseVCAM一1wasconstrucedintotherecombinantretrovirusvectorMIGR1whichexpressedthereportgeneEGFPbytheDNArecombination．T