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时间:2019-03-16
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1、京诚和皆f從中固聲3刮3據博+研究生学位论文義化京协和隆学院研究生院中国医学科学院北京协和医学院博壬研究生学位论文学校代码:10023学号;B2013004007博±学位论文年龄因素对人脂肪巧充质干细胞生物学特性的影响Aeretardeffectsongbioloicalcharacteristicsofhumangad-iposederiveds化mcells所院:整形外科医院姓名:刘美辰指导教师;曹谊林i导师小姐:肖巧;马继光;,j霞学科专业:整形外科学(专业型)研究方向:干细
2、胞基础与应用完成日期;2015年4月10日中国医学科学院北京协和医学院博±研巧生学位论文目录中文摘要1英文摘要4论文正文9引胃9材料与方法11结果27職41结52参考文献53文献综述60英文缩略词70致谢72独创性声明73学位论文版权使用授权书73中国医学科学院北京协和医学院博±研究生学位论文中文搞要研巧背景脂肪间充质干细胞AdioseDerivedStemCells,ADSCs是从脂肪组织中提取的(p)一种具有富度自我更新和多向分化潜能的多能干细
3、胞,可W参与多种组织器官的再生修复,因其来源充足,取材方便等优势,具有良好的临床应用前景。目前,自体ADSCs己在临床用于软沮织缺损修复,其在治疗也肌缺血和神经退巧性病变的应用也进入了临床试验阶段。ADSCs的生物学特性是影响干细胞治疗成败的关键因素之一。随年龄增加,细胞发生自然老化且已有研巧证实年龄因素会影响机体多种,而干细胞的生物学功能。那么,ADSCs是否随供者年龄增加而发生老化,从而导致其増殖、分化、迁移等生物学特性改变而最终影响修复功能还缺乏深入研究。研巧目的'明确不同年龄段人脂肪姐织中间充质干细胞含量和老化程度的差异,及其表现在増
4、殖、分化、迁移等生物学特性上的改变,为深入了解年龄因素对干细胞特性的影响及机制提供更丰富的信息,为不同年龄人群自体ADSCs的临床应用提供有效参考。研巧內容及方法从临床获取24例人右肋缘皮下切取脂肪组织,按供者年龄分布情况,分为H组:A--()儿童姐,年龄跨度612岁;(巧青年组,年龄跨度2227岁;(C)老年姐,年龄跨度60-73岁s至第H代P3。通过酶消化法获得hADSC,扩增用于实验检测。采用()One-ANOVA及Tuke定量资料的两两比较分析wa。具yy检验对实验结果进行多组体研巧内容包括:1.单位体积脂肪SVF含量及hADSCs
5、纯度检测romaascu胶原酶消化法获得脂肪组织中有核细胞作为基质血管成分(StlVlarFraction,SV巧,比较H组单位体积脂肪中的SVF含量差别;SVF贴壁培养获得hADSCs,流式分析P3代hADSCs干细胞表面标志物表达情况,比较H组符合干细胞表面标志表达要求的hADSCs比例。2.细胞老化程度及相关机制检测--G通过SAPal染色对各年龄组P5代hADSCs老化程度进行评价;利用MTMitoSOX巧光染色检测活细胞线粒体超氧化物含量;采用流式分析法检测hADSCs过Rea-氧亚硝酸含量ltimePC民hADSCshTERT、
6、;利用检测端粒酶逆转录酶1中国医学科学院北京协和医学院博±研巧生学位论文组蛋白去乙醜化酶SIRT1表达水平,探索不同年龄姐hADSCs出现老化程度差异的机制。3.细胞増殖及调t:检测MTS法检测各年龄组hADSCs增殖能力,并通过细胞周期分析及周期调控基因检测探索其机制;利用Muse细胞状态分析仪对细胞调t状态进行检测。4.细胞成脂成骨分化能力检测P-3代hADSCs分别成脂成骨诱导培养,在不同时间点通过沮化染色及RealtimePC民检测成脂成骨分化关键表型标志基因表达,明确不同年龄组hADSCs的多向分化能力的差异。5.细胞迂
7、移能力及其机制检测利用划线法检测无外源因子作用时hADSCs迁移能力;利用Transwell法检测趋化因子作用下hADSCs的迁移能力。比较各年龄组hADSCs迁移能力的差异,并通过检测各年龄组hADSCs趋化因子受体CXCR4和CXCR7的琴达水平探讨其机制。研巧结果s41.各年龄组单位体积脂肪SVF含量分别为:A组7.28xl〇±5.52xl〇个/ml、B组5454xxx〇6.321〇±4.511〇个/ml、C组5.53x1〇±9.881〇个/ml,细胞存活率
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