人羊膜间充质干细胞的生物学特性与研究

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1、人羊膜间充质干细胞的生物学特性与研究　　羊膜位于胎盘的最内层，主要由于外胚层的上皮细胞和于中胚层的间充质细胞构成。其不含血管，细胞成分相对简单，在胎儿娩出后即成为废弃物.人羊膜间充质干细胞（humanamnioticmesenchymalstemcells,hAMSCs）有着丰富、无需有创操作、取材几乎不受限制、分离培养方法简便、有向3个胚层的组织细胞分化的潜能、免疫原性低等多种优点，可能成为一种更加理想的间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）临床研究及应用的[1].　　1hAMSCs的生物学特性　　　　1.1免疫表型及基因

2、表达　　　　目前，hAMSCs还没有统一的表面标志物，但是大多数表面抗原和骨髓间充质干细胞（bonemarroesenchymalstemcells,BM-MSCs）相似。　　Kim等[2]通过分离羊膜间充质细胞并在体外扩增至第2、3代后获得成纤维样细胞，通过不同的培养条件分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经元细胞。免疫表型分析结果显示，其表达SSEA-3、SSEA-4、胶原蛋白-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ、-Ⅳ、-Ⅻ、纤维连接蛋白、α-SMA、波形蛋白（Vimenti）、结蛋白、细胞角蛋18（CK18）、HCAM-1、成纤维细胞表面蛋白和人类白细

3、胞抗原（HLA）-ABC;弱表达ICAM-1蛋白；不表达TRA-1-60、VCAM-1、v-1和HLA-DR.用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测发现无论传至几代，一些基因[如：Oct-4、Rex-1、SCF、神经细胞黏附分子（nervecellularadhesionmo1ecul,NCAM）、巢蛋白（Nestin）、骨形态发生蛋白（bonemorphoge-icprotein,BMP）4、心肌特异性转录因子GATA-4、肝细胞核因子（hepatocyteneclearfactor,HNF）-4α、波形蛋白（Vimen-ti）、

4、CK18]始终持续表达。而一些基因（如：鼠短尾突变体表型、FGF-5、Pax-6和BMP2）不表达。其中，研究发现，α-甲胎蛋白、HLA-ABC、HLA-DR基因表达于早期（2~3代）的细胞中而不表达于晚期（7~13代）的细胞中，且在第3代以上的细胞中可检测出端粒酶活性。近年来，流式细胞仪分选干细胞侧群技术广泛应用于提取多分化潜能干细胞。朴正福等利用流式细胞分选技术hAMSCs中分离提纯干细胞（hAMC-SP细胞），通过FACS分析结果示，此细胞表达Nestin、Vimentin、整合素家族成员（CD49b、CD49c、CD49d、CD4

5、9e）、CD9、CDl3、CDl9、CD29、CD44、CD46、CD51、CD59、CDl66及干细胞相关的Oct-3/4抗原。　　HLA-ABC、TRA-1-81及SSEA-4为弱表达；CD34、CD45、CDll7、CD56、CD90、CDl05、CDl06、CDl33、Fit1、Musashil及HLA-DR无阳性结果，TRA-1-60及SSEA-3也表达阴性。实验结果提示此细胞与其他间充质干细胞一样，不表达造血干细胞标记，表达整合素分子成员及间充质干细胞特征性表面标志蛋白。　　1.2增殖能力、免疫原性及致瘤性SSEA-3、SSEA-4是胚胎

6、干细胞和胚胎生殖细胞的表面标志特征，成体干细胞包括BMMSCs无表达。研究发现羊膜间充质细胞表达SSEA-3、SSEA-4,说明AM-MSCs可能是介于胚胎干细胞和成体干细胞之间的一个中间等级的干细胞，因此，其增殖能力比BM-MSCs更强。同时发现传至（14.5±0.9）代、培养（146.8±8.9）d后、群体培增平均数（36.9±4.7）后细胞衰老.　　人羊膜细胞的低免疫原性和人羊膜组织移植不易引起免疫排斥反应。有学者通过实验发现将AM-MSCs与人外周血单个核细胞（PBMC）或纯化的T细胞直接trans等

7、[8]发现hAMSCs较脂肪的间充质干细胞表达更高水平的血管内皮生长因子-A、血管生成素-1、肝细胞生长因子、纤维母细胞生长因子-2（FGF-2），特别是抗凋亡因子（Akt-1）也在hAMSCs中高表达。进一步研究发现，当移植hAMSCs入小鼠缺血性后肢中，观察到其自发的形成血管样结构以及表达特定的内皮基因和蛋白。移植hAMSCs后增强血液灌注及毛细血管密度，表明hAMSCs能增加新血管形成，且实验证实其移植率高。以上说明移植hAMSCs在治疗缺血性下肢中可能具有可观的疗效。　　SCs不是创伤愈合过程中绝对必需的，但其能加快创伤闭合，增加伤口处的细胞

8、外基质。而对其中转化的影响还需进一步研究。　　近来有研究发现hAMSCs在体外经自然生物诱导剂RPE（老鼠再